利用噬菌體控制原料乳中假單胞菌的研究.pdf

1、假單胞菌(Pseudomonas spp.)是原料乳中一類主要的嗜冷菌，常常能在低溫冷藏條件下生長(4～7℃)產(chǎn)生脂肪酶或蛋白酶，從而使原料乳或乳制品產(chǎn)生蛋白質(zhì)凝結(jié)、乳脂肪聚合上浮、脹包和苦包、營養(yǎng)損失、顏色和風(fēng)味改變等質(zhì)量問題。因此找到一種有效的方法對原料乳中假單胞菌進行控制對當(dāng)今的乳品工業(yè)意義重大。
　　 本研究擬用噬菌體控制原料乳中的假單胞菌，首先，從原料乳中分離并篩選出能產(chǎn)脂肪酶或蛋白酶的假單胞菌，并對分離純化后的假單胞

2、菌進行鑒定。然后，以這些假單胞菌菌株為宿主菌，采用雙層平板法從當(dāng)?shù)厥称窂S和醫(yī)院的污水中分離并純化烈性假單胞菌噬菌體。并進一步研究噬菌體的結(jié)陶以及生物學(xué)特性。最后將噬菌體應(yīng)用于原料乳體系，以期驗證噬菌體能否在原料乳體系中有效地控制假單胞菌。
　　 研究結(jié)果表明:分離得到的13株產(chǎn)脂肪酶或蛋白酶的假單胞菌中，P1、P5和P34為莓實假單胞菌（Pseudomonas fragi），P2和P12為Pseudomonas libanens

3、is，P6、 P21和P22為韋龍氏假單胞菌（Pseudomonas veronii，P24和P25為Pseudomonas psychrophila，P9為羅氏假單胞菌(Pseudomonas rhodesia),P17為Pseudomonas koreensis,P27為Pseudomonas gessardii。
　　 以上述13株假單胞菌為宿主菌，獲得13株噬菌體，均為裂菌性噬菌體，初步推斷噬菌體PP1為短尾噬菌體科（P

4、odoviridae），噬菌體PP5為囊狀噬菌體科（Cystoviridae），其余11株噬菌體為光滑噬菌體科（Leviviridae）。13株噬菌體均能對除自身宿主菌外的其余12株宿主菌中的一部分產(chǎn)生裂解作用。大多數(shù)噬菌體在4℃或25℃保持相對較高的活性，如噬菌體PP1、PP5、PP6、PP9、PP12、PP21、PP22、PP24、PP27和PP34可在4℃下能保持較高活性，噬菌體PP2、PP5、PP6、PP9、PP17、PP21、

5、PP22、PP25、PP27和PP34可在25℃保持較高活性;但僅噬菌體PP17能在37℃下維持較高活性。13株噬菌體在pH為5～7以及NaCl為1.5～5.5％的范圍內(nèi)可保持較高活力。噬菌體PP1、PP6、PP12、PP27和PP34的熱致死溫度低于50℃;噬菌體PP2、PP9、PP21、PP22和PP24熱致死溫度在50～60℃之間;而噬菌體PP5、PP17和PP25的熱致死溫度在60℃以上。13株噬菌體的潛伏期在15～25min之

6、間，裂解期在10～30min，裂解量在57士1～157士4 PFU/個范圍內(nèi)不等。噬菌體PP1、PP2、PP12、PP22、PP27和PP34的最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)為100，噬菌體PP5、PP6、PP9和PP24最佳感染復(fù)數(shù)為10，而噬菌體PP17、PP21和PP25的最佳感染復(fù)數(shù)為1。
　　 在超高溫滅菌奶中人工接種假單胞菌，該體系置于4℃下，添加噬菌體后，其中的假單胞菌數(shù)量于2d后開始呈顯著下降趨勢，并于3d降至最低，較初

7、始下降2個數(shù)量級;該體系置于25℃下，添加噬菌體后，假單胞菌數(shù)量于8h降至最低，較初始下降2個數(shù)量級。
　　 在4℃條件下放置的原料乳中添加噬菌體，與對照組相比，實驗組在3d后嗜冷菌數(shù)和菌落總數(shù)降低1個數(shù)量級;在25℃條件下放置的原料乳中添加噬菌體，與對照組相比，實驗組的嗜冷菌數(shù)和菌落總數(shù)分別在8h后及4h后降低1個數(shù)量級。
　　 本研究獲得了13株假單胞菌噬菌體，分析了這些噬菌體的形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性，采用這些噬菌體能對