Raf-1激酶對SAH后腦血管痙攣及早期腦損傷的作用及其機制的實驗研究.pdf

1、第一部分大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后Raf-1激酶在基底動脈壁表達變化的實驗研究
　　 目的:研究蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后基底動脈壁磷酸化Raf-1表達變化規(guī)律，探討其與腦血管痙攣的關(guān)系。
　　 方法:72只SD大鼠被隨機分為對照組、SAH3d組、SAH5d組和SAH7d組，利用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察SAH后基底動脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測基底動脈壁磷酸化Raf-1的

2、表達變化。
　　 結(jié)果:本實驗成功地制作了大鼠SAH模型，對照組、SAH3d組、SAH5d組和SAH7d組的管腔面積分別為57，944±5，581μm2、26，100±2，639μm2、19，723±2，412μm2和28，800±2，980μm2；SAH后第3天基底動脈就已明顯狹窄，管壁增厚、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞變性，第5天達高峰，第7天有所減輕；基底動脈壁磷酸化Raf-1在SAH后第3天即呈陽性表達，第5天最為明顯，第7天有

3、所減弱。
　　 結(jié)論: SAH后基底動脈壁磷酸化Raf-1表達上調(diào)，其活化水平在時相上的改變與基底動脈管腔狹窄及病理變化程度密切相關(guān)，提示Raf-1激酶在腦血管痙攣病理過程中可能起重要作用。
　　 第二部分 Raf-1激酶對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的作用及其機制的實驗研究
　　 目的:通過觀察Raf-1激酶抑制劑BAY43-9006對SAH后腩血管痙攣的影響，進一步探討Raf-1激酶在腦血管痙攣發(fā)生中的可能機制

4、。
　　 方法:144只SD大鼠被隨機分為對照組、SAH組、SAH+Vehicle組和SAH+BAY43-9006組，枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察基底動脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測基底動脈磷酸化Raf-1的表達變化，并檢測磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的表達變化，基底動脈IL-6和IL-1βmRNA的水平也同時檢測。
　　 結(jié)果:血管痙攣在SAH組和SAH+Vehi

5、cle組最重，管腔面積分別為17，225±4，436μm2和19，780±7，870μm2，Raf-1、ERK1/2和NF-κB在SAH后明顯激活，IL-6和IL-1βmRNA表達亦明顯增強，應(yīng)用BAY43-9006干預能抑制Raf-1、ERK1/2和NF-κB的活化及減少IL-6和IL-1β mRNA的表達，同時減輕了血管痙攣的程度。
　　 結(jié)論: Raf-1/ERK1/2和Raf-1/NF-κB信號通路在SAH后基底動脈呈現(xiàn)

6、顯著激活，Raf-1可能通過此二條通路參與腦血管痙攣的發(fā)生，應(yīng)用Raf-1激酶抑制劑可以減輕血管痙攣。
　　 第三部分 Raf-1激酶對蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的作用及其機制的實驗研究
　　 目的:研究Raf-1激酶對SAH后早期腦損傷的作用，探討Raf-1激酶在早期腦損傷發(fā)生中的可能機制。
　　 方法:96只SD大鼠被隨機分為對照組、SAH組、SAH+DMSO組和SAH+BAY43-9006組，視交叉前池注血

7、法建立大鼠SAH模型，通過檢測SAH后24h血腦屏障通透性、腦含水量和腦皮層細胞凋亡比例評價腦損傷，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測腦皮層磷酸化Raf-1的表達變化，并檢測磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的表達變化，腦皮層MMP-9、VEGF、COX-2和IκB-α的水平也同時檢測。
　　 結(jié)果:視交叉前池注血大鼠SAH模型能增加血腦屏障的破壞、腦水腫和細胞凋亡，并能導致磷酸化Raf-1、磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的

8、表達增加，同時伴有MMP-9、VEGF和COX-2的表達增加和IκB-α表達減少：應(yīng)用BAY43-9006能抑制Raf-1、ERK1/2和NF-κB的活化，減少MMP-9、VEGF和COX-2的表達，增加IκB-α的表達，同時減輕了早期腦損傷的程度。
　　 結(jié)論: Raf-1/ERK1/2和Raf-1/NF-κB3信號通路在SAH后腦組織中存在明顯激活，Raf-1可能通過此二條通路參與SAH后早期腦損傷的發(fā)生，抑制Raf-1激酶