腦腸肽ghrelin對心肺復(fù)蘇后腦損傷的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：心肺復(fù)蘇后腦損傷是導(dǎo)致心跳驟停患者復(fù)蘇后死亡和致殘的重要原因。近年來，腦腸肽ghrelin在多種疾病中的神經(jīng)保護(hù)作用被廣泛證實。本研究旨在觀察ghrelin對大鼠心肺復(fù)蘇后腦損傷的作用并初步探討其可能機(jī)制。
　　方法：第一部分：健康成年SD大鼠分三組：①sham組：僅行假手術(shù)對照；②vehicle組：經(jīng)皮電刺激心外膜法誘導(dǎo)心跳驟停并持續(xù)6 min，心肺復(fù)蘇成功后給予0.9％生理鹽水靜脈注射；③ghrelin組：經(jīng)皮電刺激心外

2、膜法誘導(dǎo)心跳驟停并持續(xù)6 min，心肺復(fù)蘇成功后給予ghrelin（80μg/kg）靜脈注射。假手術(shù)或自主循環(huán)恢復(fù)（ROSC）后24、48、72 h進(jìn)行膠帶移除實驗，評價并比較三組大鼠神經(jīng)功能損傷狀況。ROSC72 h后，處死大鼠取全腦，切片并進(jìn)行HE染色，觀察大鼠腦組織及細(xì)胞形態(tài)損傷情況并計數(shù)海馬CA1區(qū)正常細(xì)胞個數(shù)。TUNEL法染色觀察大鼠腦神經(jīng)元凋亡情況，并計數(shù)海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞個數(shù)。第二部分：健康成年SD大鼠分三組：①sham

3、組；②vehicle組；③ghrelin組。假手術(shù)或ROSC后6 h處死大鼠。（1）分別取腦組織進(jìn)行western blot和免疫組化實驗，檢測并比較三組大鼠海馬凋亡相關(guān)因子caspase-3、bax和bcl-2蛋白表達(dá)變化。（2）取腦組織進(jìn)行ELISA實驗，檢測并比較三組大鼠海馬組織炎癥因子TNF-α和IL-1β水平。（3）分別取腦組織，生化法比較海馬組織MDA含量和SOD活性，然后進(jìn)行western blot和免疫組化實驗，檢測并比

4、較三組大鼠線粒體解耦連蛋白-2（UCP-2）表達(dá)變化。（4）分別取腦皮質(zhì)組織提取純化線粒體，行功能學(xué)實驗評價并比較三組大鼠腦線粒體ATP合成效率、活性氧（ROS）產(chǎn)率；生化法比較腦皮質(zhì)MDA含量、SOD活性及ATP含量；western blot法檢測皮質(zhì)線粒體UCP-2表達(dá)水平；JC-1法觀察線粒體膜電位變化；透射電鏡法觀察并比較三組大鼠神經(jīng)元線粒體形態(tài)變化。
　　結(jié)果：（1）ghrelin提高大鼠復(fù)蘇后48 h、72 h神經(jīng)功能

5、評分，減輕神經(jīng)元形態(tài)損傷，減少海馬區(qū)細(xì)胞凋亡。（2）ghrelin降低復(fù)蘇后6 h海馬組織caspase-3蛋白表達(dá)，提高bcl-2/bax蛋白表達(dá)比值。（3）ghrelin降低復(fù)蘇后6 h海馬組織TNF-α和IL-1β水平。（4） ghrelin降低復(fù)蘇后6 h海馬組織MDA含量，提高其SOD活性。（5）ghrelin上調(diào)海馬組織UCP-2蛋白表達(dá)水平。（6）ghrelin提高復(fù)蘇后6 h腦線粒體ATP合成效率，降低其ROS產(chǎn)率。（7

6、）ghrelin降低復(fù)蘇后6 h腦皮質(zhì)組織MDA含量，提高SOD活性及ATP含量。（8）ghrelin上調(diào)腦皮質(zhì)組織UCP-2蛋白表達(dá)水平。（9）ghrelin保護(hù)皮質(zhì)線粒體膜電位。（10）ghrelin改善復(fù)蘇后腦線粒體形態(tài)損傷。
　　結(jié)論：ghrelin對心肺復(fù)蘇后腦損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減輕復(fù)蘇后凋亡、炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。ghrelin能夠改善復(fù)蘇后腦線粒體功能和結(jié)構(gòu)損傷，提高腦組織ATP含量并上調(diào)UCP-2表達(dá)