基于氨基苯并咪唑配基的疏水性電荷誘導(dǎo)層析介質(zhì)制備和蛋白吸附研究.pdf

1、疏水性電荷誘導(dǎo)層析（hydrophobic charge-induction chromatography, HCIC）是一種新型抗體分離方法，其功能配基兼有疏水和靜電相互作用，中性條件下利用疏水作用吸附目標(biāo)蛋白，調(diào)節(jié)pH改變配基的荷電特性，依靠靜電排斥作用協(xié)助蛋白洗脫。目前，HCIC介質(zhì)的蛋白吸附性能有待提高。本論文以抗體分離為目標(biāo)，以5-氨基苯并咪唑(5-aminobenzimidazole，ABI)為功能配基，比較三種配基偶聯(lián)方式

2、，制備不同配基密度的系列介質(zhì)，考察配基密度和偶聯(lián)方式對(duì)蛋白吸附的影響，以指導(dǎo)新型介質(zhì)設(shè)計(jì)。主要結(jié)果如下:
　　首先，以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，優(yōu)化ABI配基偶聯(lián)，制備了不同配基密度的ABI-B-6FF介質(zhì)。以人免疫球蛋白(hIgG)和牛血清白蛋白(BSA)為模型蛋白，考察了靜態(tài)吸附、吸附動(dòng)力學(xué)和蛋白穿透行為，發(fā)現(xiàn)隨著配基密度的增大，蛋白飽和吸附容量和有效擴(kuò)散系數(shù)逐步增大，并趨于飽和；高配基密度介質(zhì)具有更高的動(dòng)態(tài)載量，且隨流速影響小；hI

3、gG吸附量高于BSA，隨著配基密度增大，hIgG的吸附選擇性有所提高；引入孔表面配基密度，發(fā)現(xiàn)與飽和吸附容量、有效擴(kuò)散系數(shù)和動(dòng)態(tài)載量呈線性相關(guān)。
　　其次，以葡聚糖接枝的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，制備了不同配基密度的ABI-B-XL介質(zhì)。以hIgG為模型蛋白，考察了pH、添加鹽和配基密度對(duì)蛋白吸附的影響。發(fā)現(xiàn)pH影響顯著，7.0～8.5之間吸附容量較高；添加鹽對(duì)蛋白吸附影響不大，體現(xiàn)出較好的耐鹽吸附特性；隨配基密度增大，蛋白吸附容量、有效

4、擴(kuò)散系數(shù)和動(dòng)態(tài)載量均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢(shì)，最優(yōu)配基密度為220μmol/g，100cm/h線性流速下hIgG的動(dòng)態(tài)載量達(dá)66.70mg/g。結(jié)果表明，葡聚糖接枝ABI-B-XL介質(zhì)比未接枝的ABI-B-6FF介質(zhì)，抗體吸附性能顯著提高。
　　最后，以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，以甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)為接枝單體，采用原位聚合方法，通過控制GMA和配基添加量，制備了系列G-ABI-4FF介質(zhì)，配基密度顯著高于葡聚糖接枝介質(zhì)?？疾炝伺?/p>

5、基密度對(duì)介質(zhì)吸附hIgG的影響，發(fā)現(xiàn)隨配基密度增大，蛋白吸附容量、有效擴(kuò)散系數(shù)和動(dòng)態(tài)載量均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢(shì)，最優(yōu)配基密度為330μmol/g，100cm/h線性流速下hIgG的動(dòng)態(tài)載量高達(dá)82.10mg/g，且隨流速變化小。相比葡聚糖接枝介質(zhì)，GMA接枝介質(zhì)的抗體吸附性能進(jìn)一步得到改善。
　　本文圍繞新型HCIC介質(zhì)制備，系統(tǒng)考察了配基偶聯(lián)方式和配基密度對(duì)抗體吸附的影響，發(fā)現(xiàn)孔內(nèi)接枝可以有效提高吸附容量、促進(jìn)孔內(nèi)傳質(zhì)、改善動(dòng)