肺淋巴循環(huán)在矽肺發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、目的：通過測(cè)定肺內(nèi)淋巴管增生及淋巴液、血清中硅元素含量的變化情況，分析肺淋巴循環(huán)與矽塵的排出及肺纖維化之間的關(guān)系，探討肺淋巴循環(huán)在矽肺發(fā)病機(jī)制中的可能作用及地位。
　　方法： SPF級(jí)成年雄性Wistar大鼠144只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組（8只/組）、治療對(duì)照組（8只/組）、染塵組及染塵治療組（按不同采樣時(shí)間分為8個(gè)亞組，8只/組）。染塵組大鼠非暴露式氣管內(nèi)注入1ml50g/L的矽塵混懸液，染塵后分為1d、3d、5d、7d、1

2、4d、28d、42d、56d等8個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死后采樣；治療組除染塵外每日經(jīng)胃灌注銀杏葉混懸液10mg/100g，對(duì)照組中一組灌入生理鹽水，另一組灌入銀杏葉混懸液。收集各時(shí)間點(diǎn)大鼠淋巴液及血液，ICP-MS測(cè)定淋巴液及血清中硅元素水平；選取2只大鼠結(jié)扎其右肺，對(duì)左肺行墨汁-硝酸銀溶液灌注；其余大鼠處死后稱量肺濕重，取右下肺最大橫徑處組織用于石蠟包埋切片，經(jīng)HE、Masson及天狼猩紅-苦味酸染色檢測(cè)矽結(jié)節(jié)和Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)水平， Weste

3、rn blot檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3)蛋白的表達(dá)水平，試劑盒檢測(cè)羥脯氨酸表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1 HE、Masson染色結(jié)果證實(shí)動(dòng)物模型建立成功。2染塵組和染塵治療組肺組織中Ⅰ型膠原含量隨染塵時(shí)間的延長(zhǎng)而持續(xù)性增加。與對(duì)照組相比，染塵組在7d、14d、28d、42d、56d時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，染塵治療組在14d、28d、42d、56d時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與染塵組相比

4、，各時(shí)間點(diǎn)染塵治療組Ⅰ型膠原含量均減少，14d、28d、42d、56d時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3染塵組和染塵治療組肺組織中Ⅲ型膠原含量均先增高后降低。與對(duì)照組相比，染塵組和染塵治療組除1d外，其余時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與染塵組相比，各時(shí)間點(diǎn)染塵治療組Ⅲ型膠原含量均減少，7d、14d、28d、42d、56d時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4染塵組和染塵治療組肺組織中羥脯氨酸含量均持續(xù)性增加。

5、與對(duì)照組相比，染塵組除1d、3d外，其余時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，染塵治療組除1d外，其余時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與染塵組相比，各時(shí)間點(diǎn)染塵治療組羥脯氨酸含量均減少，除1d、56d外，其余時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。5肺組織經(jīng)墨汁-硝酸銀溶液灌注后，對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)明顯淋巴管增生，各時(shí)間點(diǎn)染塵組和染塵治療組血管周圍均存在不同程度的淋巴管增生。6染塵組和染塵治療組肺組織中VEGFR-3蛋白含量均

6、先增高后降低。與對(duì)照組相比，染塵組在7d、14d、28d、42d差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，染塵治療組在5d、7d、14d、28d、42d差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與染塵組相比，各時(shí)間點(diǎn)染塵治療組VEGFR-3蛋白含量均增加，7d、14d、28d、42d時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。7染塵組和染塵治療組淋巴液及血清中硅元素含量均先增高后降低。與對(duì)照組相比，染塵組和染塵治療組各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

7、.05)。與染塵組相比，染塵治療組淋巴液及血清中硅元素水平均相應(yīng)升高，各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。8肺纖維化后期，染塵組和染塵治療組淋巴、血清中硅元素水平均與羥脯氨酸表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，淋巴液、血清中硅元素水平均與VEGFR-3表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)， VEGFR-3與羥脯氨酸呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1肺纖維化過程中早期存在淋巴管的增生，后期淋巴增生減少，淋巴液及血清中硅元素水平下