海蜇糖蛋白分離純化、理化性質及結構特點研究.pdf

1、海蜇（Rhopilema esculehtum Kishinouye）是生長在海洋中營浮游生活的大型食用、暖水性水母類，在南海、東海、黃海、渤海海域有著廣泛的資源分布，種類繁多，資源十分宏厚，我國年產(chǎn)量為30萬噸左右，海蜇作為藥食兩用的海產(chǎn)品，不僅為人們提供了豐富的營養(yǎng)，還一直為古醫(yī)書所記載。但是，目前海蜇的開發(fā)利用僅僅停留在腌制或者簡單的烹調階段而少有對海蜇進行深加工和研究，導致資源的浪費。本文從海蜇中提取糖蛋白，純化得到純的海蜇糖蛋

2、白，并對其理化性質及結構特點進行研究。本文對海蜇的研究內(nèi)容及結果如下：
　　1.響應面法優(yōu)化海蜇糖蛋白的提取工藝：在單因素試驗結果的基礎上，利用Design V8.0.6設計Box-Behnken試驗，結果得到提取海蜇糖蛋白的最佳工藝條件為：NaCl濃度為0.57mol/L，浸提時間為12.50h，料液比為1:5.50，超聲破碎時間為20.00min，超聲破碎功率為275.00W；在此提取條件下的得率為：總蛋白含量為19.89％，

3、總糖含量為2.86%，糖蛋白提取得率為9.14%。
　　2.海蜇糖蛋白的分離純化及電泳鑒定：經(jīng)過提取得到的粗糖蛋白先經(jīng)過 SP SepharoseFF陰離子凝膠分離得到半純品JGP-Ⅲ，再經(jīng)過Sephacryl S-300 HR凝膠柱層析純化得到海蜇糖蛋白純品JGP-Ⅲ-Ⅱ，經(jīng)過Sephacryl S-300 HR凝膠柱層析鑒定得到單一對稱的峰，說明 JGP-Ⅲ-Ⅱ的成分較單一，純化得率為1.80%；SDS-PAGE電泳試驗后，同

4、時采用考馬斯亮藍染色和 PAS糖染色兩種染色方法，證明了JGP-Ⅲ-Ⅱ為糖蛋白，其相對分子質量為41.53KD。
　　3. JGP-Ⅲ-Ⅱ的理化性質：HPLC分析得到單一對稱的峰，連接示差檢測器后再次證明 JGP-Ⅲ-Ⅱ為糖蛋白， HPLC測得 JGP-Ⅲ-Ⅱ相對分子質量為44.196KD，與 SDS-PAGE測定結果不顯著，且其純度為98.25%；熱穩(wěn)定試驗測得JGP-Ⅲ-Ⅱ熱變性溫度為53.6℃，熱收縮溫度為92℃，糖鏈的存在

5、對其熱穩(wěn)定性起到增強的作用；氨基酸分析表明，JGP-Ⅲ-Ⅱ中含有16中氨基酸，其中7種是人體必需氨基酸，甘氨酸、纈氨酸和谷氨酸為主要成分；PMP柱前衍生化HPLC法測定顯示，JGP-Ⅲ-Ⅱ單糖成分為甘露糖、2-氨基-D-葡萄糖、氨基半乳糖、乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖，含量比例為：6.44:4.80:4.86:66.24:1.38:1.96:6.17:1.63。
　　4.JGP-Ⅲ-Ⅱ的結構特點：利用β-消除反應和PNGas