粗糙脈孢菌高產(chǎn)番茄紅素促進(jìn)劑的篩選、優(yōu)化及抗氧化活性的研究.pdf

1、番茄紅素屬于類胡蘿卜素中的一種，它是存在于天然植物中的色素?，F(xiàn)在學(xué)術(shù)已研究證實(shí)：番茄紅素?fù)碛卸喾N生理學(xué)作用：抗氧化、清除自由基、抗癌、增強(qiáng)免疫、延緩衰老、保護(hù)皮膚等作用，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和化妝品等眾多領(lǐng)域。
　　1.本文探討了微生物發(fā)酵制得的色素提取液測(cè)定番茄紅素的方法，選擇C-18柱來測(cè)定番茄紅素的總量；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為472 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為28℃；進(jìn)樣量為10μL；流動(dòng)相乙腈-二氯甲烷的混合比例(V

2、/V)為60:40此時(shí)可最好的檢測(cè)出色素提取液中的番茄紅素。對(duì)番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)后，得到番茄紅素保留時(shí)間為t=3.110，其標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=24.602x-30.721(R2=0.9956)。用標(biāo)準(zhǔn)品加入色素提取液測(cè)其濃度計(jì)算可得回收率為95％-105%之間，故標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。
　　2.以微生物細(xì)胞內(nèi)生物合成番茄紅素途徑為機(jī)理，在發(fā)酵過程中添加發(fā)酵促進(jìn)劑，這些發(fā)酵促進(jìn)劑均可通過代謝調(diào)控使粗糙脈孢菌高產(chǎn)番茄紅素。以添加時(shí)間、添加量

3、為自變量，以菌絲和孢子的生物量、番茄紅素含量和番茄紅素產(chǎn)量為因變量進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，從檸檬酸、青霉素、煙草水提物、BHT和TH篩選出具有顯著影響的四種物質(zhì)。再通過響應(yīng)面設(shè)計(jì)法優(yōu)化青霉素、煙草水提物、BHT和TH4個(gè)因素的對(duì)產(chǎn)物產(chǎn)量的影響，從響應(yīng)面值可以知道四種物質(zhì)對(duì)粗糙脈孢菌發(fā)酵產(chǎn)番茄紅素量的影響程度為：煙草水提物＞TH＞青霉素＞BHT，最佳發(fā)酵助劑組成比例為：青霉素1.2 mg/L、煙草水提物102 mg/L、BHT3.8 mg/L、T

4、H1.01 mg/L，在此條件下，由響應(yīng)面模擬預(yù)測(cè)番茄紅素總產(chǎn)量最高為13.59 mg/L。在驗(yàn)證試驗(yàn)中，得到番茄紅素總產(chǎn)量為13.50±0.65 mg/L，此值與響應(yīng)面結(jié)果所得的預(yù)測(cè)值相差不多。此培養(yǎng)方法為微生物發(fā)酵法提供相應(yīng)工藝。
　　3.本文采用有機(jī)溶劑結(jié)合超聲破碎法提取菌體細(xì)胞中的番茄紅素，超聲破碎菌體后選用丙酮和乙酸乙酯溶劑提取番茄紅素，單因素試驗(yàn)表明番茄紅素在浸提溫度65℃，浸提時(shí)間2.5 h，溶劑配比1:2(乙酸乙酯

5、:丙酮，V/V)的條件下，番茄紅素的得率最高。響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定了番茄紅素的提取條件：番茄紅素在浸提溫度為66.66℃，浸提時(shí)間2.51 h，溶劑配比0.64(乙酸乙酯:丙酮，V/V)的條件下得率最高。
　　4.由粗糙脈孢菌發(fā)酵得到番茄紅素粗提物、β-胡蘿卜素標(biāo)品、VC、VE的DPPH·自由基清除能力順序?yàn)椋害?胡蘿卜素＞VC＞番茄紅素粗提物＞VE；超氧陰離子自由基O2－?清除能力順序?yàn)椋悍鸭t素粗提物＞β-胡蘿卜素＞VC＞VE