攜帶抑制素基因pCIS質(zhì)粒的大腸桿菌滅活苗對小鼠和黃牛免疫的影響研究.pdf

1、本試驗(yàn)應(yīng)用基因免疫、細(xì)菌載體、酶聯(lián)免疫、B超等技術(shù)，研究抑制素基因免疫對小鼠和黃?？挂种扑乜贵w的產(chǎn)生、繁殖性能、安全性的影響，通過滅活的大腸桿菌來傳遞抑制素基因疫苗，可能是一種提高抑制素基因免疫效果的方法，將為建立提高動物繁殖力的新技術(shù)奠定基礎(chǔ)。主要試驗(yàn)內(nèi)容如下：
　　 1、用含目的基因的大腸桿菌滅活苗免疫小鼠的試驗(yàn)研究
　　 本實(shí)驗(yàn)中，小鼠被分成四個(gè)大組，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組和兩個(gè)對照組。每一個(gè)試驗(yàn)組又分為三個(gè)不同的劑量。試驗(yàn)組

2、分別注射：pCIS/普魯卡因、pCIS/DDA和滅活菌；對照組注射：pcDNA3.1(-)和PBS。結(jié)果表明：首次免疫后，大腸桿菌處理組的抑制素抗體P/N值平均水平達(dá)到2，三個(gè)劑量之間沒有顯著差異(P>0.05)；普魯卡因和DDA處理組中50μg劑量組誘導(dǎo)的抗體P/N值比其它兩個(gè)劑量都要顯著(P<0.05)；大腸桿菌處理的各組的P/N值比質(zhì)粒最好劑量組的值要低，但差異不明顯(P>0.05)。加強(qiáng)免疫后，各試驗(yàn)組的P/N值有所增高，但沒有

3、顯著差異(P>0.05)，與對照組比差異極顯著(P<0.01)，其它與初次免疫的結(jié)果相似。免疫后誘導(dǎo)的抗體陽性牛頭數(shù)，大腸桿菌處理組三個(gè)劑量之間差別不大，但是質(zhì)粒組的各劑量間差異很大。普魯卡因組在第二次免疫后最高抗體陽性牛為90％，而最低為50％；DDA組在加強(qiáng)免疫后最小的抗體陽性率只有30％。產(chǎn)仔數(shù)方面，滅活大腸桿菌組的產(chǎn)仔數(shù)比對照組高，劑量間差異不大；與質(zhì)粒組相比，差異也不顯著；最多產(chǎn)仔數(shù)出現(xiàn)在普魯卡因組的50μg劑量組。免疫后的母

4、鼠體重和器官指數(shù)，結(jié)果顯示沒有異常情況出現(xiàn)。總的來說，含目的基因的大腸桿菌滅活苗免疫小鼠取得的效果與佐劑處理的差異不大，但是用大腸桿菌來傳遞抑制素基因疫苗，可以減少免疫時(shí)注射的有效劑量，同時(shí)免疫效果沒有降低，因此，用大腸桿菌來傳遞抑制素基因疫苗是可行的，可以向大動物上推廣。
　　 2、用含目的基因的大腸桿菌滅活苗免疫黃牛的試驗(yàn)研究
　　 本研究中采用PMSG、抑制素質(zhì)粒疫苗和攜帶目的質(zhì)粒的大腸桿菌滅活苗來免疫黃牛。裸質(zhì)粒

5、免疫時(shí)添加佐劑普魯卡因和DDA，滅活苗組分三個(gè)劑量。結(jié)果表明：初次免疫后各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的的P/N值都比較低，加強(qiáng)免疫后各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的的P/N值明顯增高，加強(qiáng)免疫后20天再檢測抗體水平，各試驗(yàn)組的P/N值有所下降。用滅活菌免疫黃牛，三個(gè)不同劑量的P/N值在各次免疫中都沒有顯著差異(P>0.05)；與兩個(gè)質(zhì)粒免疫組相比，它們之間差異也不顯著(P>0.05)。用PMSG處理的10頭牛中整個(gè)免疫期抑制素抗體的P/N值都較低。普魯卡因和DDA處理組在初

6、次免疫后抗體陽性牛均為2頭，第二次免疫后抑制素抗體陽性牛達(dá)到3頭；滅活菌組三個(gè)不同劑量所產(chǎn)生的抗體陽性牛頭數(shù)也不相同，最大劑量在兩次免疫中誘導(dǎo)的抑制素抗體陽性牛頭數(shù)是最多的。發(fā)情時(shí)用B超對母牛卵巢檢測結(jié)果表明，滅活菌組產(chǎn)生的成熟卵泡數(shù)與佐劑處理的兩個(gè)質(zhì)粒組之間差異很小，比PMSG處理組成熟卵泡數(shù)發(fā)育個(gè)數(shù)差異顯著(P<0.05)。排卵方面，用PMSG處理的10頭黃牛中有6頭排雙卵，比對照組多4頭；滅活菌處理的最小劑量組黃牛中共有3頭排多卵

7、，劑量越大誘導(dǎo)排雙卵的百分?jǐn)?shù)越大。試驗(yàn)組陰性牛和陽性牛比較，滅活菌處理組中間劑量組的抗體陽性牛的的成熟卵泡發(fā)育個(gè)數(shù)與陰性牛的相比差異不明顯，多0.92個(gè)，其它兩個(gè)劑量組與抗體陰性牛的成熟卵泡發(fā)育個(gè)數(shù)都有顯著差異(P<0.05)。
　　 以上分析表明用滅活菌免疫黃牛，雖然與PMSG處理組差異較大，但是和質(zhì)粒組差異不顯著，由于本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的三個(gè)劑量在誘導(dǎo)排雙卵上最大劑量相對較好，因此我們還不能確定用滅活菌免疫黃牛的最佳劑量是多少，而