運(yùn)動發(fā)酵單胞菌和大腸桿菌間穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建及大腸桿菌K-12 talB基因的表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、運(yùn)動發(fā)酵單胞菌屬于革蘭氏陰性菌，微好氧生長。Z.mobilis是目前發(fā)現(xiàn)的乙醇發(fā)酵能力最強(qiáng)的微生物之一，被認(rèn)為是進(jìn)行大規(guī)模乙醇生產(chǎn)的潛在菌種。Z.mobilis可利用的碳源僅為葡萄糖、果糖和蔗糖，利用基因工程手段改造Z.mobilis，拓寬其可利用碳源的范圍，是當(dāng)前Z.mobilis基因工程改造工作的首要任務(wù)之一。 基因工程改造首先需要有好的載體系統(tǒng)。本研究以Z.mobilisATCC10988中內(nèi)源質(zhì)粒pZM2(2749bp)

2、和E.coli中的質(zhì)粒pBR328(4907bp)、pACYC184(4245bp)為出發(fā)質(zhì)粒，構(gòu)建Zmobilis-E.coli之間的克隆型穿梭質(zhì)粒。首先分別制備含pZM2的復(fù)制區(qū)和分配區(qū)的DNA片段，插入到pBR328的四環(huán)素抗性基因中，構(gòu)建出pZB2(Apr、Cmr，pZM2復(fù)制區(qū))和pZB3(Apr、Cmr，pZM2復(fù)制區(qū)和分配區(qū))；進(jìn)一步分離pACYC184中的四環(huán)素抗性基因DNA片段，分別連接到pZB2和pZB3中，得到pZ

3、B21(Apr、Cmr、Tcr，pZM2復(fù)制區(qū))和pZB31(Apr、Cmr、Tcr，pZM2復(fù)制區(qū)和分配區(qū))；然后分別對pZB21、pZB31在E.coliDH5α和ZmobilisCP4中的穩(wěn)定性、拷貝數(shù)進(jìn)行了比較分析，結(jié)果是：pZB21、pZB31都優(yōu)于實(shí)驗(yàn)室先前構(gòu)建的pZB1，而pZB31又優(yōu)于pZB21，故選定pZB31作為穿梭載體。最后，以pZB31為載體，在ZmobilisCP4中表達(dá)E.coliK-12的talB基因，酶

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