人脂肪干細(xì)胞對急性肺損傷大鼠肺內(nèi)皮型一氧化氮合酶的影響.pdf

1、目的:急性肺損傷是由肺外致病危險(xiǎn)因子發(fā)動或介導(dǎo)的以肺血管通透性增加為主要病理生理學(xué)改變的疾病，常作為急診及各種危重癥病情惡化的表征或并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，進(jìn)展迅速，死亡率高。雖然經(jīng)過多年的基礎(chǔ)研究和臨床探索，目前對于急性肺損傷治療的問題，未能完全有效解決。近些年來，隨著多潛能分化干細(xì)胞逐漸被熟知，利用干細(xì)胞對多種疾病進(jìn)行治療在臨床實(shí)踐中取得重大突破，也為治療急性肺損傷提供了一種潛在的、具有可操作性的治療新思路。現(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)，干細(xì)胞

2、對急性肺損傷有良好的治療效果。但在干細(xì)胞治療急性肺損傷過程中，干細(xì)胞對肺血管修復(fù)方面的研究尚未有詳細(xì)的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯咳酥靖杉?xì)胞對脂多糖作用后的離體大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮型一氧化氮合酶的影響;以及人脂肪干細(xì)胞通過尾靜脈移植到急性肺損傷大鼠的體內(nèi)，對在體肺組織中的內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白的影響。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)采用0.1％Ⅰ型膠原酶消化人脂肪組織，獲取人脂肪干細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀對人脂肪干細(xì)胞表面抗原CD90、CD1

3、06、CD34進(jìn)行鑒定;通過大鼠外周肺組織塊獲取大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞，用免疫熒光方法對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面Flt-1、vWF抗原進(jìn)行鑒定。離體實(shí)驗(yàn)，脂多糖5μg/ml作用于大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞4小時(shí)后，對照組采取更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)72小時(shí);實(shí)驗(yàn)組采取更換正常培養(yǎng)基，并通過0.4μm的Transwell與人脂肪干細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)72小時(shí)，免疫熒光檢測大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達(dá)變化。在體實(shí)驗(yàn)，除空白組腹腔注射生理鹽水外，

4、其他組均采用腹腔注射脂多糖（6mg/kg）復(fù)制大鼠急性肺損傷模型。半小時(shí)后，空白組、急性肺損傷組，尾靜脈注射生理鹽水;治療組，尾靜脈移植5×105個(gè)人脂肪干細(xì)胞到大鼠急性肺損傷的體內(nèi)。7天后，檢測大鼠肺濕/干重比，Western Blot檢測肺組織中的內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:1.人脂肪干細(xì)胞表面抗原CD90高度表達(dá)，90.6％; CD106少量表達(dá)，7.5％;CD34幾乎不表達(dá)，1.8％。
　　

5、2.大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面Flt-1、vWF抗原鑒定檢測呈陽性。
　　 3.離體實(shí)驗(yàn):72小時(shí)后，對照組與實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)組的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)明顯增加。
　　 4.在體實(shí)驗(yàn):7天后，治療組肺濕/干重比與急性肺損傷組比較顯著降低(P＜0.05)。治療組肺組織中的內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白表達(dá)與急性肺損傷組比較顯著增加（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:人脂肪干細(xì)胞可以促進(jìn)脂多糖作用后的大鼠肺