EGCG對(duì)NB4細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分EGCG通過(guò)活化p38αMAPK-Bax途徑誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)主要探討EGCG是否能夠誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡及其可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　分別用不同濃度的EGCG處理NB4細(xì)胞，或預(yù)先用p38αMAPK的抑制劑PD169316處理NB4細(xì)胞半小時(shí)，再用相應(yīng)濃度的EGCG處理NB4細(xì)胞。用CCK-8方法測(cè)定NB4細(xì)胞增殖狀況，用FITC-AnnexinV/PI雙染色法測(cè)定NB4細(xì)

2、胞凋亡狀況，用Western-Blot檢測(cè)p38αMAPK、p-p38αMAPK、Bcl-2和Bax蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　隨著EGCG濃度的增加，CCK-8結(jié)果顯示EGCG依賴濃度梯度抑制NB4細(xì)胞增殖；流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)EGCG能夠明顯促進(jìn)NB4細(xì)胞凋亡；同時(shí)Western-Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)p-p38αMAPK和Bax蛋白質(zhì)表達(dá)水平升高，與EGCG濃度呈正相關(guān)，然而Bcl-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平隨EGCG濃度升高而降低

3、。在用p38αMAPK抑制劑處理后，CCK-8結(jié)果表明EGCG抑制細(xì)胞增殖的能力明顯減弱，同時(shí)流式細(xì)胞術(shù)顯示EGCG促進(jìn)細(xì)胞凋亡的能力也減弱；Western-Blot結(jié)果顯示Bax蛋白質(zhì)表達(dá)程度降低，但Bcl-2蛋白質(zhì)表達(dá)程度無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　EGCG可能通過(guò)活化p38αMAPK-Bax途徑誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡。
　　第二部分EGCG通過(guò)SHP-1調(diào)節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡
　

4、　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)主要觀察EGCG是否通過(guò)SHP-1調(diào)節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡。
　　方法：
　　分別用不同濃度的EGCG處理NB4細(xì)胞，或預(yù)先用SHP-1的抑制劑NSC87877處理NB4細(xì)胞半小時(shí)，再用相應(yīng)濃度的EGCG處理NB4細(xì)胞。用CCK-8方法測(cè)定NB4細(xì)胞增殖狀況，用FITC-AnnexinV/PI雙染色法檢測(cè)NB4細(xì)胞凋亡狀況，用 Western-Blot檢測(cè)SHP-1、p3

5、8αMAPK、p-p38αMAPK和Bax蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　Western-Blot檢測(cè)結(jié)果顯示EGCG能夠促進(jìn)SHP-1蛋白質(zhì)表達(dá)。預(yù)先用SHP-1抑制劑NSC87877處理后，SHP-1蛋白質(zhì)的表達(dá)水平明顯降低；同時(shí)CCK-8結(jié)果顯示EGCG抑制細(xì)胞增殖的能力減弱，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明EGCG促進(jìn)細(xì)胞凋亡的能力也減弱，Western-Blot檢測(cè)結(jié)果顯示p-p38αMAPK和Bax蛋白質(zhì)表達(dá)水平隨之減少，