養(yǎng)心通脈方對異丙腎上腺素心衰大鼠防治機理的研究.pdf

1、目的:(1)從維持內(nèi)皮素(ET)/中介素(IMD)平衡的內(nèi)源性細(xì)胞保護機制方面研究阻斷神經(jīng)內(nèi)分泌因子過度激活的藥物作用新靶點,為臨床開發(fā)有效治療心力衰竭(HF)的新藥提供新思路;(2)觀察養(yǎng)心通脈方對異丙腎上腺素(ISO)誘導(dǎo)HF大鼠心肌重構(gòu)的防治作用及內(nèi)源性細(xì)胞保護機制,為開發(fā)具有地方民族特色的,有效治療HF的中藥新藥提供科學(xué)的實驗依據(jù).
　　 方法:用1％的戊巴比妥鈉20～25mg/kg給予大鼠腹腔注射麻醉,然后皮下注射IS

2、O,170mg·kg-1,分2次,每次間隔24h,制備心力衰竭模型,心肌組織病理切片觀察心肌損傷;采用左心室和股動脈插管法及四道生理記錄儀記錄平均動脈血壓(MABP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室最大壓力上升及心室內(nèi)壓的變化率(±dp/dt)和心電圖;生物化學(xué)法檢測血漿和心肌組織超氧化物歧化酶(SOD))和丙二醛(MDA)及血漿乳酸脫氫酶(LDH);酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿和心肌組織中介素(IMD)和內(nèi)皮素(E

3、T)含量測定;采用生物化學(xué)方法測定組織Ma+-K+-ATPase活性;采用免疫印跡法檢測凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤(Bcl-2),Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)和心肌蛋白激酶B(Akt)蛋白表達.
　　 結(jié)果:
　　 (1)與正常對照組相比,模型組大鼠的左室收縮壓降低18.4%,舒張末壓升高604.5%(P＜0.01),平均動脈血壓降低32.7%,心室內(nèi)壓升高最大變化速率和心室內(nèi)壓降低最大變化速率分別降低70%和143.5%(

4、P＜0.01);養(yǎng)心通脈方低劑量組大鼠的左室收縮壓沒有顯著變化,平均動脈血壓降低16.8%,心室舒張末壓升高200.5%(P＜0.01),心室內(nèi)壓升高最大變化速率和心室內(nèi)壓降低最大變化速率分別降低25%和55.7%;養(yǎng)心通脈方高劑量組大鼠的平均動脈血壓、左室收縮壓、心室內(nèi)壓升高最大變化速率沒有顯著變化,心室舒張末壓升高100%(P＜0.01),心室內(nèi)壓降低最大變化速率降低18.6%.與模型組比較,養(yǎng)心通脈方低劑量組大鼠平均動脈血壓和左室

5、收縮壓沒有顯著變化,心室舒張末壓降低98.6%,心室內(nèi)壓升高最大變化速率和心室內(nèi)壓降低最大變化速率分別增加33.3%和56.3%(P＜0.01);養(yǎng)心通脈方高劑量組大鼠平均動脈血壓和左室收縮壓沒有顯著的變化,心室舒張末壓降低148.6%,心室內(nèi)壓升高最大變化速率和心室內(nèi)壓降低最大變化速率分別增加62.7%和105.5%(P＜0.01)。與養(yǎng)心通脈方低劑量組比較,養(yǎng)心通脈方高劑量組大鼠平均動脈血壓和左室收縮壓沒有顯著的變化,心室舒張末壓降

6、低50.6%,心室內(nèi)壓升高最大變化速率和心室內(nèi)壓降低最大變化速率分別增加25.5%和31.3%(P＜0.01).
　　 (2)異丙腎上腺素導(dǎo)致HF大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖T波高聳,并伴有ST段抬高,而養(yǎng)心通脈方對Ⅱ?qū)?lián)心電圖T波高聳顯著降低,ST段抬高程度得到改善。與養(yǎng)心通脈方低劑量組比較,養(yǎng)心通脈方高劑量組改善程度最明顯。
　　 (3)心肌組織病理切片顯示,與正常對照組比較,模型組心內(nèi)膜下層有大片纖維化區(qū)域和散在的局部心肌壞死

7、灶,剩余的心肌纖維增粗,排列紊亂,腫脹、斷裂、橫紋肌消失,甚至溶解,發(fā)生玻璃樣變和脂肪變性,問質(zhì)組織增生.與模型組比較,養(yǎng)心通脈方低劑量組心肌纖維排列紊亂,心室壁無明顯增厚,心內(nèi)膜下層有散在的纖維化區(qū),壞死區(qū)域顯著減小,呈小灶狀和條狀,剩余的心肌纖維排列整齊。養(yǎng)心通脈方高劑量組心肌纖維基本正常,排列較整齊,無腫脹、斷裂、溶解和脂肪變性現(xiàn)象出現(xiàn)。
　　 (4)Western b10t檢測心肌組織凋亡蛋白Bcl-2,Bax的蛋白表達

8、顯示,模型組凋亡蛋白表達Bcl-2水平顯著降低,而Bax蛋白表達增加,Bcl-2/Bax比值降低,差異有顯著性(P＜0.05).養(yǎng)心通脈方處理后,Bcl-2表達增加,Bax表達降低,Bcl-2/Bax比值升高,與模型組相比有顯著性差異(P＜0.01).養(yǎng)心通脈方高劑量組最顯著.
　　 (5)Western blot檢測心肌組織Akt,結(jié)果顯示,與正常對照組比較,模型組顯著減低了Akt蛋白的表達水平;養(yǎng)心通脈方處理后,Akt蛋白的

9、表達水平明顯增加,以養(yǎng)心通脈方高劑量組最為顯著。
　　 (6)與正常對照組相比較,模型組大鼠血漿和心肌組織的超氧化物歧化酶(SOD)分別降低59.7%和41.8%,養(yǎng)心通脈方高低劑量組血漿和心肌組織的超氧化物歧化酶(SOD)分別降低39.0%、19.6%和24.8%、8.7%,統(tǒng)計學(xué)均有顯著性差異(均P＜0.05);與模型組比較,養(yǎng)心通脈方低高劑量組大鼠血漿和心肌組織的超氧化物歧化酶(SOD)分別增加14.7%、34%和13.6

10、%、41.8%,統(tǒng)計學(xué)均有顯著性差異(均P＜0.05);血漿和心肌組織的丙二醛(MDA)分別降低29.7%、62.6%和103.5%、163%,統(tǒng)計學(xué)均有顯著性差異(均P＜0.01);血漿乳酸脫氫酶(LDH)分別降低45.7%和68.1%,統(tǒng)計學(xué)均有顯著性差異(均P＜0.01).與養(yǎng)心通脈方低劑量組比較,養(yǎng)心通脈方高劑量組大鼠血漿和心肌組織的超氧化物歧化酶(SOD)分別增加16.1%和36.4%;血漿和心肌組織的丙二醛(MDA)分別降低

11、25.2%和29.3%;血漿乳酸脫氫酶(LDH)降低15.3%,統(tǒng)計學(xué)均有顯著性差異(均P＜0.05)。
　　 (7)正常對照組大鼠血漿和心肌組織IMD的濃度分別為29.2±5.0pg/ml和1.58±0.23pg/mg·pro.ISO處理后,血漿和心肌組織IMD的分泌顯著減少,與正常對照組比較有顯著性差異(P＜0.05).與模型組比較,養(yǎng)心通脈方低劑量組血漿和心肌組織IMD均增加,但無統(tǒng)計學(xué)意義;高劑量養(yǎng)心通脈方處理后,無論血

12、漿和心肌組織IMD濃度均增加(P＜0.01).正常對照組大鼠血漿和心肌組織ET的濃度分別為32.2±9.3pg/ml和1.09±0.39pg/mg·pro。與正常對照組相比較,ISO處理后血漿和心肌組織ET的分泌顯著增加(P＜0.01),養(yǎng)心通脈方處理后,無論血漿和心肌組織ET濃度均減低(P＜0.01).
　　 (8)正常對照組大鼠心肌質(zhì)膜Na+-K+-ATP酶活性是0.57±0.01μmolPi/mg pro·h.與正常對照組

13、比較,模型組Na+-K*-ATP酶活性降低138.5%(0.24±0.01vs0.57±0.01,P＜0.01)。養(yǎng)心通脈方處理后能夠明顯增加Na+-K+-ATP酶活性,分別比模型組增加49.0%和55.6%,有顯著性差異(均P＜0.01)。高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.01).
　　 結(jié)論:(1)HF時ET升高,IMD下降,ET/IMD平衡失調(diào),維持ET/IMD平衡關(guān)系在HF的防治中可作為新的藥物作用靶點。(2)

14、養(yǎng)心通脈方能夠改善異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠的血流動力學(xué),能減少脂質(zhì)過氧化物MDA、LDH的生成和增加SOD活性,拮抗HF時氧化應(yīng)激損傷。(3)養(yǎng)心通脈方防治HF的作用與增加Akt蛋白的表達水平,誘導(dǎo)Bcl-2蛋白的表達,減少促凋亡基因Bax蛋白的表達,從而降低心肌細(xì)胞的凋亡有關(guān)。(4)養(yǎng)心通脈方能夠降低HF大鼠內(nèi)源性損傷物質(zhì)ET,增加心臟內(nèi)源性保護物質(zhì)IMD,維持細(xì)胞內(nèi)源性防護機制的平衡,增加Na+-K+-ATP酶活性,使心肌細(xì)胞