肥胖癥小鼠肺部炎癥反應中相關炎癥細胞α7 nAChR表達水平的研究.pdf

1、目的:肥胖癥是威脅我國居民生命健康的重要因素。肥胖癥時除了機體脂肪的累積外,伴隨著機體內潛在的肺部促炎與抗炎平衡的改變,這種改變會影響肺部對外界刺激的炎癥應答狀態(tài)。神經(jīng)免疫調控對機體的炎癥水平起著重要的調節(jié)作用,已有多項研究證實膽堿能抗炎通路在膿毒癥中的抗炎調控作用。α7nAChR是膽堿能抗炎通路的關鍵受體,我們擬通過研究肥胖癥小鼠與正常小鼠肺部α7nAChR+細胞的比例及其α7nAChR表達強度的差異,及在LPS刺激后上述因素的差異,

2、為研究肥胖癥對小鼠肺部炎癥反應的影響提供新的思路。
　　方法:1、將6周齡C57BL/6J小鼠隨機分為肥胖癥組和正常體重組,肥胖癥組給予高脂飲食,正常體重組給予普通飲食,各組小鼠每兩周測一次體重,飼養(yǎng)18周后超過正常體重組平均體質量10％～20％定義為超重,超過正常體重組平均體質量20％定義為肥胖癥。從肥胖癥小鼠和正常體重小鼠中,各隨機抽出一組小鼠,然后隨機進行生理鹽水或LPS氣管內滴入,得到正常體重生理鹽水滴入組,正常體重LPS

3、滴入組,肥胖癥生理鹽水滴入組,肥胖癥LPS滴入組共4組小鼠;2、對肥胖癥組小鼠和正常體重小鼠進行空腹血糖及糖耐量測定,評估肥胖癥小鼠與正常小鼠的代謝紊亂情況;3、通過氣管插管LPS滴入進行LPS誘導的肺部炎癥反應模型制作,以HE染色評估模型制作效果;4、通過HE染色,觀察肥胖癥小鼠和正常小鼠未經(jīng)LPS刺激時肺部白細胞浸潤情況及LPS刺激后白細胞浸潤情況,評估四組小鼠之間炎癥反應的差異;5、通過肺組織油紅O染色,觀察肥胖癥小鼠與正常小鼠肺

4、部脂肪顆粒累積情況;6、制備小鼠肺單細胞懸液,通過流式細胞術檢測各組小鼠肺部CD45+細胞亞群比例,并確定肺部α7nAChR表達水平相對較高的細胞亞群,并通過流式細胞術進一步分析肥胖癥小鼠與正常小鼠及LPS刺激后相關細胞亞群的比例,然后分析這些亞群中的α7nAChR+細胞亞群比例,及α7nAChR+細胞亞群中α7nAChR中位表達強度的差異。
　　結果:1、經(jīng)過18周的高脂飲食誘導,肥胖癥小鼠體重明顯高于正常小鼠(P＜0.05);

5、2、肥胖癥小鼠與正常小鼠相比空腹血糖水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05),肥胖癥小鼠糖耐量較正常小鼠明顯受損(P＜0.001);3、肺切片HE染色結果顯示LPS誘導的肺部炎癥模型制作成功;4、HE染色顯示肥胖癥小鼠與正常小鼠相比肺部不存在明顯改變,LPS刺激后肥胖癥小鼠與正常小鼠相比肺部沒有明顯差異;5、肥胖癥小鼠同正常小鼠相比,肺部脂肪顆粒累積明顯增加。6、流式細胞術分析結果顯示中性粒細胞,單核細胞,肺泡巨噬細胞,肺間質巨噬細胞存在α7n

6、AChR+的細胞亞群。肥胖癥可影響小鼠肺部CD45+細胞比例,未經(jīng)LPS刺激的肥胖癥小鼠肺部CD45+細胞比例高于正常小鼠(P＜0.01)。肥胖癥可影響小鼠肺泡巨噬細胞亞群比例(P＜0.05),未經(jīng)LPS刺激的肥胖癥小鼠肺泡巨噬細胞亞群比例高于正常小鼠(P＜0.05),且LPS刺激對肺泡巨噬細胞比例的影響在正常小鼠與肥胖癥小鼠之間存在差異(P＜0.05)。肥胖癥對小鼠肺部α7nAChR+肺泡巨噬細胞、α7nAChR+中性粒細胞、α7nA

7、ChR+單核細胞α7nAChR表達水平?jīng)]有影響(P＞0.05,P＞0.05,P＞0.05),而對小鼠肺部α7nAChR+肺間質巨噬細胞α7nAChR表達水平有影響,肥胖癥小鼠與正常小鼠相比α7nAChR+肺間質巨噬細胞α7nAChR表達水平升高(P＜0.05),這種差異主要由LPS刺激引發(fā)(P＜0.05)。
　　結論:肥胖癥小鼠同正常小鼠相比CD45+細胞浸潤增加,肺泡巨噬細胞比例增高,提示肺部炎癥反應增強。肥胖癥小鼠同正常小鼠相