MSC調(diào)控DCs對(duì)ARDS小鼠肺部炎癥反應(yīng)影響的研究.pdf

1、目的:
　　驗(yàn)證MSC通過(guò)調(diào)控DCs減輕ARDS小鼠肺部炎癥反應(yīng)。
　　方法:
　　C57BL/6小鼠64只，隨機(jī)（隨機(jī)數(shù)字法）分為①對(duì)照組:小鼠氣道內(nèi)注射與LPS等體積的NS，30min后尾靜脈注射與MSC等體積的PBS;②ARDS組:小鼠氣道內(nèi)注射LPS5mg/kg復(fù)制ARDS模型，30min后尾靜脈注射與MSC等體積的PBS;③MSC組:小鼠氣道內(nèi)注射LPS5mg/kg復(fù)制ARDS模型，30min后尾靜脈注射MS

2、C(100，000個(gè)細(xì)胞重懸于100μl PBS);④DCreg組:小鼠氣道內(nèi)注射LPS5mg/kg復(fù)制ARDS模型，30min后尾靜脈注射DCreg(100，000個(gè)細(xì)胞重懸于100μl PBS)。6h和24h后處死小鼠，留取肺、脾臟、血液檢測(cè):(1)小鼠肺DCs的數(shù)量及成熟狀態(tài)檢測(cè):流式細(xì)胞法(FCM)檢測(cè)肺單細(xì)胞懸液中DCs數(shù)量及DCs表達(dá)CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平。(2)小鼠脾臟DCs的數(shù)量、成熟狀態(tài)及功能

3、檢測(cè):FCM檢測(cè)脾臟單細(xì)胞懸液中DCs數(shù)量及DCs表達(dá)CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平;FITC-葡聚糖法檢測(cè)脾臟DCs的吞噬功能;混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)脾臟DCs誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖能力。(3)小鼠肺損傷程度檢測(cè):HE染色行肺組織病理學(xué)檢查并行肺損傷評(píng)分評(píng)價(jià)肺損傷嚴(yán)重程度;計(jì)算肺濕重/體重比評(píng)價(jià)肺水腫程度;伊文思藍(lán)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)肺血管內(nèi)皮通透性。(4)小鼠肺和全身炎癥反應(yīng)檢測(cè):計(jì)算肺泡灌洗液中有核細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)炎癥

4、細(xì)胞的浸潤(rùn)程度;ELISA法檢測(cè)肺組織勻漿和血清中IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、TGF-β的濃度評(píng)價(jià)肺部和全身炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　(1)MSC能夠抑制肺DCs的數(shù)量和成熟狀態(tài):與ARDS組比較，MSC組肺DCs比例在6h后有下降趨勢(shì)（1.54±0.09）％，在24h后較ARDS組顯著下降（1.81±0.2）％(p＜0.05);與ARDS組比較，MSC組肺DCs表達(dá)CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD

5、40水平在24h均顯著降低(p＜0.05)。
　　(2)MSC能夠抑制脾臟DCs的數(shù)量、成熟狀態(tài)和免疫原性，增強(qiáng)脾臟DCs的吞噬能力:與ARDS組比較，MSC組脾臟DCs比例6h顯著下降(2.02±0.15)％(p＜0.05)，24h脾臟DCs進(jìn)一步降至（1.29±0.07）％;與ARDS組比較，MSC組肺DCs表達(dá)CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平在6h和24h均顯著降低(p＜0.05);ARDS組與MSC組脾臟D

6、Cs在6h的吞噬功能無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，在24h點(diǎn)MSC組脾臟DCs的吞噬功能較ARDS組顯著增加(p＜0.05)，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖的能力較ARDS組顯著下降(p＜0.05)，該脾臟DCs符合DCreg特性，說(shuō)明MSC能誘導(dǎo)脾臟DCreg的生成。
　　(3)DCreg和MSC可降低LPS誘導(dǎo)的ARDS小鼠肺部和全身炎癥反應(yīng):與ARDS組比較，DCreg和MSC在6h、24h均可顯著減輕BALF中有核細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞

7、數(shù)，同時(shí)能有效降低肺組織和血清促炎介質(zhì)IL-4、IL-17水平，并增加抗炎介質(zhì)IL-10、IFN-γ和TGF-β水平(p＜0.05）。
　　(4)DCreg和MSC減輕LPS誘導(dǎo)的ARDS小鼠肺損傷:與ARDS組比較，DCreg和MSC在6h和24h均可顯著減輕肺病理?yè)p傷、降低肺損傷評(píng)分、減少肺濕重/體重比、降低肺微血管內(nèi)皮對(duì)伊文思藍(lán)的通透性(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　MSC通過(guò)抑制DCs的數(shù)量和成熟狀態(tài)、同時(shí)