對蝦integrin介導(dǎo)白斑桿狀病毒感染以及日本對蝦凝集素表達及功能研究.pdf

1、對蝦是主要的水產(chǎn)養(yǎng)殖對象，爆發(fā)性疾病的持續(xù)發(fā)生給對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失，對蝦白斑桿狀病毒W(wǎng)SSV是對蝦的主要病原。宿主細胞受體及免疫因子與病毒的相互識別、相互作用對病毒的感染及宿主防御致關(guān)重要。迄今尚無有關(guān)WSSV與對蝦細胞受體、免疫因子間相互作用的文獻報道。
　　 粘合素integrin是細胞表面的主要受體，介導(dǎo)多種病毒尤其是具有囊膜的病毒的感染。WSSV多種結(jié)構(gòu)蛋白含有integrin結(jié)合配基。本文對對蝦β-integri

2、n細胞膜外功能區(qū)進行了克隆表達、純化。以純化的integrin為Bait對WSSV基因組噬菌體展示庫進行篩選，獲得四種克隆子。免疫共沉淀實驗證明其中三種與integrin能夠結(jié)合。這三種克隆子分別表達WSSV的膜蛋白Vp187(wsv209)，vp136A(wsv271)和ORF wsv049。內(nèi)源蛋白的免疫共沉淀進一步證明了天然integrin與VP187間的結(jié)合。Vp187含有兩個integrin的結(jié)合基序(-RGD and KGD

3、)，vp136A含有一個RGD，wsv049含有一個DLIRL。人工感染實驗中可溶性integrin、integrin抗體、RGD能夠抑制WSSV感染。sRNA干擾integrin表達時對蝦及對蝦血淋巴細胞對WSSV的易感性降低。結(jié)果表明integrin參與了WSSV的感染，這是首次發(fā)現(xiàn)的與WSSV感染有關(guān)的對蝦細胞受體。
　　 無脊椎動物缺乏免疫球蛋白等高度特異性免疫因子，為了保護自身必須形成強大的能夠識別多種多樣異物的機制，

4、因此對其免疫識別因子的尋找一直是國內(nèi)外許多學(xué)者的研究重點之一。但迄今尚無對蝦防御因子與病毒識別、相互作用的報道。凝集素品種繁多、數(shù)目龐大、無處不在。它在對外來入侵活動進行的異物識別、防御、凝集、吞噬、包囊及其隨后的創(chuàng)傷修復(fù)等一系列反應(yīng)中，起著重要作用。迄今只有少數(shù)文獻對個別對蝦凝集素進行研究報道。本文用WSSV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP26、VP28、VP281、VP466和對蝦細胞受體integrin篩選對蝦cDNA噬菌體展示庫，并由此獲得多種

5、具有CTLD(C-type lectindomain)結(jié)構(gòu)的蛋白cDNA序列。分析了該類對蝦免疫因子的cDNA序列多樣性，并對其進行了表達純化及功能分析。首次在無脊椎動物中發(fā)現(xiàn)凝集素與病毒及細胞受體間的作用，首次發(fā)現(xiàn)對蝦凝集素能阻斷WSSV侵入對蝦血淋巴細胞，該結(jié)果與脊椎動物中凝集素能通過阻斷細胞受體與病毒接觸、結(jié)合而阻止病原入侵的理論一致。首次發(fā)現(xiàn)WSSV膜蛋白VP281對脊椎動物細胞的凝集活性、發(fā)現(xiàn)病毒結(jié)構(gòu)蛋白、細胞受體integr