寬體金線蛭中胰蛋白酶抑制劑的純化及多肽鋅的制備與性質(zhì)研究.pdf

1、寬體金線蛭是列入國(guó)家藥典的藥用動(dòng)物，其組織中含有超過200種的多肽或蛋白質(zhì)，其中一些多肽或蛋白質(zhì)具有藥物價(jià)值和生物活性，如水蛭素對(duì)凝血酶就具有很強(qiáng)的抑制作用。另外，寬體金線蛭中除了蛋白酶抑制劑外，其組織還含有豐富的蛋白質(zhì)，這些蛋白可以作為制備多肽金屬離子螯合物理想的蛋白源，從而避免提煉完藥用成分后的寬體金線蛭作為藥渣丟棄處理，造成蛋白質(zhì)的浪費(fèi)。本研究以寬體金線蛭作為研究材料，利用各種生物分離技術(shù)方法，從其皮膚粘液中逐步分離純化出一種對(duì)胰

2、蛋白酶具有抑制作用的抑制劑，并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行了研究；同時(shí)利用寬體金線蛭組織作為蛋白源制備出了一種具有抗菌活性的多肽鋅螯合物，并對(duì)其制備工藝和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了深入的研究。本研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.依次通過Sephadex G-50凝膠層析、DEAE陰離子交換層析、Resource15反相色譜層析技術(shù)，從寬體金線蛭皮膚粘液中分離純化出一個(gè)分子量約為36.6KD的蛋白質(zhì)，將其命名為WTI。通過測(cè)試，發(fā)現(xiàn)WTI不僅對(duì)胰蛋白酶具有較強(qiáng)的

3、抑制活性還具有較好的酸堿和熱穩(wěn)定性。
　　2.以寬體金線蛭組織為蛋白源，用木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶組成的復(fù)合酶對(duì)寬體金線蛭組織進(jìn)行酶解，然后將酶解得到的多肽與硫酸鋅在不同條件下進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)過硫化鈉法定性分析鑒定出反應(yīng)產(chǎn)物為一種多肽鋅螯合物。隨后對(duì)其進(jìn)行抑菌活性的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)寬體金線蛭多肽鋅螯合物對(duì)濃度為105cfu/mL的大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑菌圈分別達(dá)到22mm和13mm。
　　3.對(duì)制備的多肽鋅螯合物和原料多肽進(jìn)行紫外、紅