淤血對(duì)大鼠部分肝切除后早期肝再生的影響.pdf

1、[目的]在部分肝切除的基礎(chǔ)上建立大鼠獨(dú)立肝葉淤血的動(dòng)物模型，觀察淤血對(duì)大鼠部分肝切除后早期肝再生和肝功能的影響。
　　 [方法]實(shí)驗(yàn)分為兩部分：第一部分，建立大鼠獨(dú)立肝葉淤血?jiǎng)游锬Ｐ停簩?shí)驗(yàn)前期進(jìn)行大鼠肝臟解剖學(xué)研究，熟悉大鼠肝臟解剖，建立大鼠獨(dú)立肝葉淤血?jiǎng)游锬Ｐ?。第二部分，研究淤血?duì)大鼠早期肝切除術(shù)后肝再生的影響：①實(shí)驗(yàn)大鼠為雄性Wistar大鼠，6-8周齡，體重200-220g，術(shù)前均不禁水、食。建立70％肝切除合并尾狀葉淤血

2、動(dòng)物模型與50％肝切除合并右中葉淤血?jiǎng)游锬Ｐ?。②?shí)驗(yàn)大鼠分為4組：70％肝切除合并尾狀葉淤血組(A1組)，70％肝切除組A2組(A1組的對(duì)照組)，50％肝切除組合并右中葉淤血組(B1組)，50％肝切除組B2組(B1組的對(duì)照組)，每組24只。術(shù)后不同時(shí)間(1d、2d、3d、5d)處死大鼠，每時(shí)段每組處死6只，采集血樣和肝臟標(biāo)本，取樣前仔細(xì)稱量移植物重量。標(biāo)本置入-80℃凍存以備進(jìn)一步分析。③相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：測(cè)血清ALT水平，評(píng)估肝細(xì)胞損傷的

3、程度(自動(dòng)生化分析儀)；病理學(xué)觀察采用肝組織經(jīng)10％福爾馬林固定，石蠟包埋，制成4μm厚的切片，HE染色，光鏡下觀察不同肝葉病理變化；免疫組化染色檢測(cè)PCNA并計(jì)算PCNA指數(shù)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期并計(jì)算肝臟S期細(xì)胞比率；肝組織TNF-α測(cè)定及血中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子測(cè)定采用相應(yīng)試劑盒說(shuō)明方法進(jìn)行測(cè)定。④數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 [結(jié)果

4、]
　　 第一部分：部分肝切除聯(lián)合獨(dú)立肝葉淤血?jiǎng)游锬Ｐ头€(wěn)定，可以用于進(jìn)行相關(guān)研究；
　　 第二部分：1.病理變化：實(shí)驗(yàn)組淤血區(qū)域于術(shù)后第二天發(fā)生點(diǎn)灶狀壞死，部分區(qū)域片狀壞死，大部分肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變性，術(shù)后第五天時(shí)出現(xiàn)纖維組織增生；非淤血區(qū)域術(shù)后第1、2、3天時(shí)均出現(xiàn)不同比例的氣球樣變性，術(shù)后第五天非淤血區(qū)域肝組織基本恢復(fù)正常。
　　 2.肝功能變化：四組血清ALT水平均于術(shù)后第1天達(dá)到高峰，并隨時(shí)間的推移逐漸降

5、低，A1組和其對(duì)照組A2組相比較，術(shù)后第一天、第二天、第三天，A1組的ALT水平明顯高于A2組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；B1組和其對(duì)照組B2組相比，術(shù)后第一天、第二天、第三天和第五天，B1組的ALT水平明顯高于B2組(P<0.01)。
　　 3.肝再生情況：(1)肝再生指數(shù)：各組術(shù)后肝右葉肝體比隨時(shí)間推移逐漸增加，A1組和B1組，術(shù)后第一天、第二天、第三天和第五天時(shí)，肝右葉的肝體比均明顯高于其對(duì)照組(P<0

6、.01)，殘肝總體肝體比術(shù)后第一天、第二天、第三天和第五天時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；(2)PCNA指數(shù)和S期肝細(xì)胞比例：本研究發(fā)現(xiàn)增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表達(dá)與肝細(xì)胞S期比例的變化是基本一致的，術(shù)后第一天、第二天和第三天時(shí)A1組和B1組均高于其對(duì)照組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)HGF水平：各組HGF水平均于術(shù)后第一天達(dá)到高峰

7、，A1組和其對(duì)照組A2組相比，術(shù)后第一天、第二天和第三天，A1組血清HGF水平明顯高于A2組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；B1組和其對(duì)照組B2組相比，術(shù)后第一天、第二天和第三天，B1組血清HGF水平明顯高于B2組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；(4)TNF-α水平：術(shù)后各組肝組織勻漿中TNF-α水平均于術(shù)后第二天達(dá)到高峰，A1組和其對(duì)照組A2組相比，術(shù)后第一天、第

8、二天和第三天，A1組肝組織勻漿中TNF-α水平明顯高于A2組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；B1組和其對(duì)照組B2組相比，術(shù)后第一天、第二天和第三天，B1組血清肝組織勻漿中TNF-α水平明顯高于B2組(P<0.01)，術(shù)后第五天時(shí)兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.部分肝切除聯(lián)合獨(dú)立肝葉淤血模型穩(wěn)定，可用于相關(guān)的研究。
　　 2.術(shù)后早期，局部淤血在