水稻開(kāi)花基因RID1功能的初步研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室此前已經(jīng)鑒定了一個(gè)水稻“不開(kāi)花”突變體rid1，導(dǎo)致不開(kāi)花的原因是由于T-DNA插入RID1(RiceindeterminateⅠ)基因位點(diǎn),使得RID1基因的功能發(fā)生缺失所造成。本研究以此突變體材料為基礎(chǔ)，利用超量表達(dá)、特異性表達(dá)、原核表達(dá)及原位雜交技術(shù)來(lái)研究RID1基因的功能，為研究水稻開(kāi)花機(jī)制提供依據(jù)。本研究獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　 1.通過(guò)PCR方法獲得RID1基因組序列和全長(zhǎng)cDNA序列，并克隆到超量表達(dá)

2、載體pu2301上，構(gòu)建的超表達(dá)載體分別命名為Ubq:RID1g和Ubq:RID1c；通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，分別得到109和80株T0代再生植株，PCR陽(yáng)性檢測(cè)顯示，Ubq:RID1g中陽(yáng)性植株20株，其中9株恢復(fù)抽穗表型；Ubq:RID1c中陽(yáng)性植株7株，其中6株恢復(fù)抽穗表型。說(shuō)明我們構(gòu)建的超量表達(dá)載體有功能，RID1cDNA序列有效。
　　 2.通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)了Ubq:RID1g和Ubq:RI

3、D1c轉(zhuǎn)化得到的陽(yáng)性植株中抽穗期基因RID1、Ehd1、Hd1、Hd3a、RFT1的表達(dá)量。結(jié)果顯示恢復(fù)抽穗表型的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株中RID1基因都得到了超量表達(dá)；同時(shí)，還得到了兩個(gè)恢復(fù)抽穗表型的轉(zhuǎn)基因陰性植株，分別是Ubq:RID1g中的＃68和Ubq:RID1c中的＃27，在這兩個(gè)植株中，RT-PCR檢測(cè)不到RID1基因的表達(dá)。通過(guò)RT-PCR還檢測(cè)了植株＃27Ti代12個(gè)單株中RID1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：Ti代12個(gè)植株中都檢測(cè)不到

4、RID1基因的表達(dá)，但都能檢測(cè)到開(kāi)花關(guān)鍵基因Hd3a的表達(dá)，且Ti代12個(gè)單株全部恢復(fù)抽穗表型，沒(méi)有出現(xiàn)表型分離。
　　 3.利用葉片特異性啟動(dòng)子Hd3a，構(gòu)建了載體Hd3a::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植株41株，陽(yáng)性植株10株，其中有2株恢復(fù)抽穗，RT-PCR檢測(cè)了陽(yáng)性植株＃28中RID1的表達(dá)譜，結(jié)果顯示在植株＃28的葉片、葉鞘、莖、根中都能檢測(cè)到RID1的表達(dá)，表明RID1表達(dá)不特異。
　　

5、 4.利用分生組織特異性啟動(dòng)子Osh1，構(gòu)建了載體Osh1::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植株8株，陽(yáng)性植株7株，所有陽(yáng)性植株都恢復(fù)抽穗，RT-PCR檢測(cè)了陽(yáng)性植株＃6中RID1的表達(dá)譜，結(jié)果顯示在植株＃6的葉片、葉鞘、莖、頂端組織中都能檢測(cè)到RID1的表達(dá)，表明RID1表達(dá)不特異。
　　 5.利用維管組織特異性啟動(dòng)子Rpp16，構(gòu)建了載體Rpp16::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植

6、株31株，陽(yáng)性株有19株，其中9株恢復(fù)抽穗表型，RT-PCR檢測(cè)了陽(yáng)性植株＃8中RID1的表達(dá)譜，結(jié)果顯示在植株＃8中，在富含維管束組織的葉片、葉鞘、莖中都能檢測(cè)到RID1的表達(dá)，而在不含維管束組織的頂端分生組織和根中檢測(cè)不到或只能檢測(cè)到微量表達(dá)。我們還通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了T0代再生陽(yáng)性植株中抽穗期基因的表達(dá)情況，結(jié)果表明RID1基因在微管組織中特異表達(dá)可以促進(jìn)水稻抽穗，且能正調(diào)控其他抽穗期基因的表達(dá)。
　　 6.構(gòu)建了表達(dá)載