蛇床子素對阿爾茨海默病模型大鼠認(rèn)知障礙的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的退行性疾病，以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙、情感及行為改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，其病因和發(fā)病機(jī)制不詳，治療效果欠佳。隨著老齡化進(jìn)程的日益加劇，研發(fā)治療AD的有效藥物已成為目前的研究熱點。
　　盡管AD的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但目前大量研究表明，AD發(fā)病的核心病理環(huán)節(jié)可能是β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Aβ)激活膠質(zhì)細(xì)胞引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性損傷

2、。Toll樣受體4（toll-like receptor4，TLR4）是膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元表面重要的模式識別受體，在Aβ誘導(dǎo)炎性因子產(chǎn)生中扮演著關(guān)鍵性的角色。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(Tumor necrosisfactor receptor associated factor6，TRAF6)是TLR4下游一種重要的接頭蛋白，可促使核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)發(fā)生核轉(zhuǎn)位，從而誘導(dǎo)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，最終引起

3、炎性因子的大量釋放，導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷。因此，減輕Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥成為治療AD的潛在靶點。
　　近年來，國內(nèi)外研究者在治療AD方面大力研究天然藥物有效成分，希望能從中研發(fā)出治療該病的有效藥物。蛇床子素(osthole，Ost)是傳統(tǒng)中藥蛇床子的組成成分，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等多種的藥理作用。多項研究表明，蛇床子素可以改善記憶損害，有望成為治療該病的有效藥物。然而，其改善記憶損害的確切機(jī)制仍未闡明。本實驗通過向大鼠雙側(cè)海馬注射凝

4、聚態(tài)Aβ1-42建立AD模型，觀察大鼠行為學(xué)變化，海馬神經(jīng)元的組織病理學(xué)改變，膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)和TLR4，TRAF6及NF-κB在大鼠海馬組織中的表達(dá)情況，探討蛇床子素對AD模型大鼠認(rèn)知障礙的神經(jīng)保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　方法:健康雄性SD大鼠48只，體重250±50g，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，分為假手術(shù)組(Sham group)，假手術(shù)+蛇床子素組(Sham+Ost group)，AD模型組(Aβ1-42 group)，AD模型+蛇床子

5、素組(Aβ1-42+Ost group)，每組12只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，藥物干預(yù)組按25mg/kg預(yù)給藥（采用腹腔注射的方式）一周，一次/天，而Sham組和Aβ1-42組給予等體積的溶劑。給藥一周后，應(yīng)用腦立體定位儀將凝聚態(tài)Aβ1-42各10μg注射到大鼠雙側(cè)海馬區(qū)，從而建立AD動物模型。造模后繼續(xù)給予藥物干預(yù)一周，然后進(jìn)行Morris水迷宮實驗評價大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的改變;用HE染色法觀察大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的組織病理學(xué)變化;用免疫

6、組織化學(xué)法及免疫印記法觀察大鼠海馬CA1區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)及TLR4、TFAF6和NF-κB的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1 Morris水迷宮實驗:Sham組、Sham+Ost組、Aβ1-42組及Aβ1-42+Ost組比較穿越平臺次數(shù)不同(F=47.614，P＜0.05)，逃避潛伏期不同(F=25.778，P＜0.05)。與Sham組相比，Aβ1-42組穿越平臺次數(shù)顯著減少(P＜0.05），逃避潛伏期顯著延長(P＜0.05）。

7、而應(yīng)用蛇床子素干預(yù)后，與Aβ1-42組相比，Aβ1-42+Ost組穿越平臺次數(shù)明顯增加(P＜0.05），逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05）。
　　2 HE染色:4組大鼠海馬CA1區(qū)均可見變性神經(jīng)元，表現(xiàn)為神經(jīng)元胞膜皺縮，胞體縮小且藍(lán)染加深，核固縮，染色質(zhì)邊集等。Sham組和Sham+Ost組海馬CA1區(qū)僅有少量變性的神經(jīng)元;而Aβ1-42組海馬CA1區(qū)變性神經(jīng)元明顯增多;應(yīng)用蛇床子素干預(yù)后，變性神經(jīng)元數(shù)量減少，形態(tài)和結(jié)構(gòu)均有不同程

8、度的恢復(fù)。
　　3蛇床子素減輕膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng):與Sham組相比，Aβ1-42組Iba-1和GFAP的蛋白表達(dá)水平及陽性細(xì)胞數(shù)目顯著增多(P＜0.05);而Aβ1-42+Ost組與Aβ1-42組相比，Iba-1和GFAP的蛋白表達(dá)水平及陽性細(xì)胞數(shù)目明顯下降(P＜0.05)。
　　4蛇床子素下調(diào)TLR4、TRAF6和NF-κB的表達(dá):Aβ1-42組與Sham組相比，TLR4、TRAF6和NF-κB的陽性細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P＜0.0

9、5），蛋白表達(dá)水平明顯升高(P＜0.05）;蛇床子素干預(yù)后，TLR4、TRAF6和NF-κB的蛋白表達(dá)水平和陽性細(xì)胞數(shù)目均顯著下降，與Aβ1-42組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1向雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ1-42可以成功建立AD動物模型來模擬AD的病理及行為學(xué)改變。
　　2 Aβ1-42可以誘導(dǎo)海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞大量活化，TLR4、TRAF6和NF-κB的表達(dá)上調(diào)，海馬神經(jīng)元變性，說明