SPK1對阿爾茨海默病細胞模型的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:探討鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SPK1)對β淀粉樣蛋白誘導的阿爾茨海默病細胞模型是否具有保護作用及其可能的機制。
　　方法:(1)以β-淀粉樣肽片段25-35(amyloidβ-peptide fragment25-35,Aβ25-35)處理已分化的小鼠神經瘤細胞(mouse Neuro-2a,N2a)作為阿爾茨海默病的細胞模型,將不同濃度的Aβ25-35加入培養(yǎng)的N2a細胞24h后通過四甲基

2、偶氮唑(MTT)法檢測細胞活性;Hoechst33258染色檢測細胞凋亡率;透射電鏡觀察細胞核的超微結構。比較各組的差異。(2)將20μM的Aβ25-35加入培養(yǎng)的N2a細胞24h,應用免疫印跡技術檢測SPK1蛋白水平的表達變化。然后構建腺病毒載體感染細胞干預SPK1的表達,通過MTT法檢測細胞活性;Hoechst33258染色檢測細胞凋亡率;透射電鏡觀察細胞核的超微結構。比較各組的差異,用以觀察調節(jié)SPK1水平對Aβ25-35誘導的神

3、經毒性的影響。(3)應用免疫印跡技術檢測上述各組凋亡相關蛋白表達;應用透射電鏡觀察上述各組線粒體超微結構。比較各組的差異。
　　結果:(1)隨Aβ25-35濃度增加,細胞活性下降,細胞凋亡率增加,20μM的Aβ25-35處理分化的N2a細胞24h符合阿爾茨海默病細胞模型。(2)Aβ組與對照組相比,SPK1蛋白水平下降;Ad-SPK1+Aβ組與Aβ組相比,細胞活性增高,凋亡率下降;SPK1-siRNA+Aβ組與Aβ組相比,細胞活性下

4、降,凋亡率增高。(3)Aβ組與對照組相比,Bax/Bcl-2比例明顯增加,出現(xiàn)結構損壞的線粒體;Ad-SPK1+Aβ組與Aβ組相比,Bax/Bcl-2的比例下降,線粒體結構明顯改善;SPK1-siRNA組與Vector組相比,Bax/Bcl-2的比例增高,出現(xiàn)結構損壞的線粒體。
　　結論:Aβ25-35誘導N2a細胞SPK1表達下降,上調SPK1的表達可以減輕Aβ25-35對N2a細胞的毒性損傷,其保護作用可能與調節(jié)凋亡相關蛋白B