二苯乙烯苷對LPC誘導血管內皮細胞損傷的保護作用的研究.pdf

1、目的:
　　 觀察在溶血性磷脂酰膽堿(LPC)誘導下,二苯乙烯苷(TSG)對血管內皮細胞(VEC)損傷的保護作用,并對其作用機制進行的研究。
　　 方法:
　　 培養(yǎng)人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC)株,經傳代,于第3-4代用于實驗。隨機將細胞分為:空白對照:模型組;實驗組。
　　 首先將LPC以10ug/ml作用于HUVEC,并與細胞一起孵育24小時誘導內皮細胞損傷,建立細胞損傷的模型;將TSG以10.

2、0;1.0;0.1μol/l預先作用于HUVEC1小時后,再給予10μm/ml的LPC作用于HUVEC共同孵育24小時,建立實驗組;同時,設立不加藥物的空白對照組。然后,收集細胞上清液測定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)含量;收集細胞,測定其中的活性氧(ROS)水平、細胞的凋亡率和存活率。用硝酸還原酶法檢測細胞上清液中的NO的濃度;用硫代巴比妥法檢測細胞上清液中MDA的含量;生物素雙抗體夾心酶聯免疫

3、吸附法(ELISA)檢測細胞上清液中ADMA含量;熒光顯微鏡觀察細胞內ROS水平、AnnexinV-FITC/PI熒光雙染色法流式細胞儀測定其細胞的凋亡率、MTT法檢測細胞的存活率。
　　 結果:
　　 1.與空白對照組比較結果顯示,用LPC(10μg/ml)作用于HUVEC24小時后,觀測到細胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P＜0.05),ADMA含量(P＜0.05)及細胞內ROS水平(P＜0.05)都顯著性增加,而細胞培養(yǎng)

4、上清液中NO含量明顯降低(P＜0.05),細胞的凋亡有所增加(P＜0.05),致使細胞的存活率降低(P＜0.05)。
　　 2.與LPC損傷組比較中,可以看到,以10.0,1.0,0.1umol/l濃度的TSG作用HUVEC1小時后,再予以終濃度為10μg/ml的LPC作用HUVEC一起孵育24小時后,顯示:其均能使細胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P＜0.05)、ADMA含量(P＜0.05)及細胞內ROS水平(P＜0.05)顯著性降