Th1-Th2失衡與慢性乙型肝炎肝纖維化發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：以IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2平衡，通過觀察不同纖維化程度CHB患者外周血Th1、Th2細(xì)胞頻率，外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs)中IFN-γ、IL-4 mRNA表達(dá)，血清IFN-γ、IL-4水平以及肝組織IFN-γ、IL-4蛋白表達(dá)，旨在探討Th1/Th2平衡在CHB肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：收集2011年3月至2011年10月在河北醫(yī)

2、科大學(xué)第三醫(yī)院感染科接受肝組織病理活檢的C皿患者46例，其中男性31例，女性15例。CHB的診斷符合中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會及肝病學(xué)分會聯(lián)合制定的2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。肝纖維化病理分期依據(jù)2000年版《病毒性肝炎防治方案》的標(biāo)準(zhǔn)，其中S0-1期患者15例、92-3期患者20例、S4期患者11例。另取同期我院10例健康志愿者作為血清學(xué)健康對照，10例肝移植的供體作為組織學(xué)正常對照
　　所有患者入院次晨取空腹靜

3、脈血，應(yīng)用全自動生化分析儀檢測血清生化指標(biāo)；酶免疫法檢測HBV血清學(xué)標(biāo)志物：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb；全自動血凝儀檢測凝血指標(biāo)；real-time PCR檢測HBVDNA水平(檢測下限為500 copies/mL)。
　　應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血Th1細(xì)胞頻率和Th2細(xì)胞頻率；real-timePCR檢測PBMCs中IFN-γ、IL-4 mRNA表達(dá)；雙抗體夾心ELISA檢測血清IFN-γ、IL-

4、4因子水平；免疫組織化學(xué)染色檢測肝組織IFN-γ、IL-4蛋白表達(dá)。
　　用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示。多組比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。多因素分析采用Logistic回歸分析。
　　結(jié)果：
　　1一般資料
　　各組研究對象的的年齡和性別比例具有可比性。各臨床常規(guī)指標(biāo)與肝纖維

5、化分期相關(guān)性分析顯示：年齡、男性、AST、TB、DB、TBA、GGT、ALKP、PT、INR與纖維化分期呈正相關(guān)；白蛋白、CHE、PTA、PLT與纖維化分期呈負(fù)相關(guān)；ALT、HBV DNA及HBeAg狀態(tài)與纖維化分期無明顯相關(guān)性(分別為P=0.074；P=0.244；P=0.172)。
　　2外周血Th1、Th2細(xì)胞頻率變化情況
　　Th1細(xì)胞頻率在正常對照組、S0-1組、S2-3組和S4組間無明顯差異(P>0.05)。Th

6、2細(xì)胞頻率在各組間有顯著差異(P<0.05)，且隨纖維化程度加重逐漸升高，其中S0-1、S2-3和S4組間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，但S0-1組與正常對照組相比無明顯差異(P>0.05)。與正常對照組相比，Th1/Th2細(xì)胞頻率的比值在各纖維化組均呈不同程度下降，尤以S2-3組、S4組下降更為顯著(均P<0.05)，而S0-1組與正常對照組相比無明顯差異(P>0.05)，同時(shí)S2-3、S4組較S0-1組也顯著下降(均P<

7、0.05)。
　　3 PBMCs中IFN-γ與IL-4 mRNA表達(dá)變化情況
　　PBMCs中IFN-γ與IL-4 mRNA水平在正常對照組、S0-1組、S2-3組和S4組間均有差異(均P<0.05)，兩者的表達(dá)均隨肝纖維化程度加重逐漸升高(均P<0.05)，其中IL-4 mRNA升高趨勢更為明顯，但兩者在S0-1組與正常對照組的表達(dá)均無顯著差異(均P>0.05)。S0-1組、S2-3組和S4組CHB患者IFN-γ/IL-4

8、 mRNA比值隨纖維化程度加重逐漸下降，依次為0.96±0.11、0.71±0.16、0.44±0.14，以S4組下降最為顯著，各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，但S0-1組與正常對照組比較無顯著差異(P>0.05)。
　　4血清IFN-γ與IL-4水平變化情況
　　CHB患者血清IFN-γ水平與正常對照組比較呈不同程度升高(P<0.05)，尤以S2-3組、S4組升高更為顯著(均P<0.05)，但S0-1組

9、與正常對照組比較無顯著差異，S2-3組、S4組血清IFN-γ水平較S0-1組也明顯升高(均P<0.05)，而S2-3組和S4組比較無顯著差異。CHB患者血清IL-4水平隨肝纖維化程度加重逐漸升高，且各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，但S0-1組與正常對照組比較無明顯差異。血清IFN-γ/IL-4比值在正常對照組、S0-1組、S2-3組和S4組依次降低，分別為2.05±0.10、2.13±0.28、2.09±0.62、0

10、.80±0.08，S4組的IFN-γ/IL-4比值明顯低于S0-1組和S2-3組(均P<0.05)，而后兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且S0-1組、S2-3組與正常對照組比較也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CHB患者血清IFN-γ/IL-4比值與肝纖維分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.616，P<0.01)。
　　5肝組織IFN-γ與IL-4表達(dá)比值變化情況
　　CHB患者肝內(nèi)IFN-γ表達(dá)較正常對照組明顯升高(P<0.05)，其中S4組患者肝內(nèi)IFN-γ

11、的表達(dá)明顯低于S0-1組和S2-3組(分別為Z=-3.815，P=0.000；Z=-4.418，P=0.000)，后兩者比較亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-3.367，P=0.000)。肝內(nèi)IL-4的表達(dá)在正常對照組、S0-1組、S2-3組和S4組依次為30322.3±7260.3、791094.5±60882.8、1291570.0±355263.9、1910577.0±156621.1，呈現(xiàn)隨肝纖維化程度加重逐漸升高的趨勢，各組間兩兩比較均

12、有顯著差異(均P<0.05)。IFN-γ/IL-4比值隨肝纖維化程度加重逐漸降低，在S0-1組、S2-3組、S4組依次為5.13±0.53、4.39±0.50、1.64±0.12，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001)。CHB患者中IFN-γ/IL-4比值與肝纖維分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.531，P<0.01)。CHB患者肝組織內(nèi)IFN-γ、IL-4主要表達(dá)于匯管區(qū)淋巴細(xì)胞，部分肝細(xì)胞內(nèi)可見少量陽性表達(dá)。在正常肝組織僅有少量IFN-γ表

13、達(dá)于淋巴細(xì)胞胞漿，而IL-4幾乎不表達(dá)。
　　6 Logistic逐步回歸分析發(fā)生明顯肝纖維化(S2-4)的危險(xiǎn)因素
　　將CHB患者分為輕度肝纖維化(S0-1)和明顯肝纖維化(S2-4)兩組，單因素比較顯示輕度纖維化組與明顯肝纖維化組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床常規(guī)指標(biāo)為年齡、性別、白蛋白、AST、TB、DB、TBA、GGT、ALKP、CHE、PT、PTA、INR、PLT，共14項(xiàng)。Logistic逐步回歸分析顯示血清IFN-γ

14、/IL-4比值是發(fā)生明顯肝纖維化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一(OR值為4.755，95％CI為1.034～21.862，P=0.045)。
　　結(jié)論：
　　1 CHB患者外周血及肝組織內(nèi)Th1/Th2比值較正常對照組明顯下降，不同纖維化程度CHB患者外周血及肝組織內(nèi)均存在Th1/Th2失衡，并且隨肝纖維化程度進(jìn)展，外周血及肝臟內(nèi)均呈現(xiàn)Th1向Th2漂移的現(xiàn)象。
　　2血清及肝組織中IFN-γ/IL-4水平比值與肝纖維分期均呈負(fù)相