核受體CAR在多環(huán)芳烴芘引起的肝毒性的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：多環(huán)芳烴是一類(lèi)常見(jiàn)的持續(xù)性環(huán)境污染物，主要來(lái)源于有機(jī)物的不完全燃燒。當(dāng)前人類(lèi)暴露在各種含有多環(huán)芳烴的環(huán)境中，例如汽車(chē)尾氣、工業(yè)污水以及受污染的食物等。已有研究表明多環(huán)芳烴對(duì)人類(lèi)的身體健康會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的危害。芘是含有四個(gè)苯環(huán)的多環(huán)芳烴，在美國(guó)環(huán)境保護(hù)組織列出的16種優(yōu)先控制的PAHs污染物種類(lèi)中所占比例較高。但是目前關(guān)于芘對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生毒性作用機(jī)制研究尚未出現(xiàn)比較完善的科學(xué)報(bào)道。組成型雄甾烷受體CAR是核受體超家族中的重要成員，能夠在

2、肝臟中高度表達(dá)，在動(dòng)物機(jī)體受到外源或內(nèi)源化合物入侵時(shí)，它能通過(guò)調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)來(lái)控制這些物質(zhì)在體內(nèi)的代謝。本研究旨在說(shuō)明核受體CAR在芘引起的肝毒性中的介導(dǎo)作用，為預(yù)防和降低芘的危害提供理論依據(jù)。
　　方法：選用8周大雄性的CAR基因敲除小鼠和其同窩出生的野生型小鼠（C57BL/6）作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)體重隨機(jī)分組，對(duì)照組灌胃玉米油，實(shí)驗(yàn)組灌胃兩種劑量的芘（150和300 mg/kg/day），連續(xù)4天灌胃后第5天處死小鼠。為了探

3、究核受體CAR是否能夠被芘激活，本實(shí)驗(yàn)還以小鼠單次腹腔注射3 mg/kg的TCPOBOP作為陽(yáng)性對(duì)照。斷頭處死小鼠，收集血液，離心得上清，測(cè)定血清中ALT含量。解剖小鼠取得肝臟，將一小塊肝臟組織浸泡在10％的中性福爾馬林緩沖液中，用石蠟包埋，蘇木精和伊紅染色后進(jìn)行病理切片觀察。抽提肝組織總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用熒光定量PCR法以GAPDH基因含量為內(nèi)參，檢測(cè)肝組織中有關(guān)藥物代謝酶的基因表達(dá)。用Western Blot方法以Lam

4、inβ為細(xì)胞核蛋白的內(nèi)參，GAPDH為細(xì)胞總蛋白內(nèi)參，檢測(cè)有關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴芘暴露能夠使野生型小鼠肝細(xì)胞核中的CAR蛋白含量顯著上升，并且上調(diào)其靶基因CYP2B10的mRNA表達(dá)，但是不能使CAR基因敲除小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的變化。⑵在兩種劑量的芘暴露下，野生型小鼠的相對(duì)肝重相對(duì)比較對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的升高，而CAR基因敲除小鼠沒(méi)有升高。⑶在兩種劑量的芘暴露下，野生型小鼠血清中的ALT水平較其對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的上升，

5、而CAR基因敲除小鼠沒(méi)有出現(xiàn)相應(yīng)的毒性癥狀。⑷高劑量的芘暴露下（300 mg/kg/day），野生型小鼠肝組織切片較對(duì)照組相比，出現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)紅染，細(xì)胞核固縮等病理變化；而CAR基因敲除小鼠較對(duì)照組相比，沒(méi)有出現(xiàn)相應(yīng)變化。⑸芘暴露下的野生型小鼠，肝組織中的藥物代謝酶CYP2B10、CYP3A11、GSTm1、GSTm3和 SULT1A1的mRNA表達(dá)較對(duì)照組相比都有顯著意義的上升（P＜0.05），但是相同處理下的CAR基因敲除小

6、鼠相應(yīng)酶的mRNA表達(dá)較對(duì)照組相比沒(méi)有發(fā)生具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變化。芘暴露下的野生型小鼠和CAR基因敲除小鼠肝臟中CYP1A1和CYP1A2的mRNA表達(dá)較對(duì)照組相比都有顯著意義的上升（P＜0.05）。但是芘暴露下的野生小鼠較其對(duì)照組相比，肝臟中UGT1A6的mRNA表達(dá)水平下降，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而CAR基因敲除小鼠此基因的表達(dá)水平較對(duì)照組相比沒(méi)有發(fā)生變化。⑹高劑量芘暴露下（300 mg/kg/day）的野生型小鼠，肝組織