白鶴芋花序體細(xì)胞胚胎發(fā)生及快繁技術(shù)研究.pdf

1、本研究以白鶴芋花序?yàn)橥庵搀w，開展花序體胚直接誘導(dǎo)和快繁技術(shù)的研究，觀察白鶴芋花序體細(xì)胞胚胎發(fā)生時(shí)期，篩選體細(xì)胞組培快繁的最佳培養(yǎng)方案。主要研究結(jié)果如下:
　　1.白鶴芋花序體細(xì)胞胚發(fā)生
　　(1)白鶴芋花序滅菌試驗(yàn)，采用3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的白鶴芋花序作為試驗(yàn)材料，用0.1％升汞溶液進(jìn)行不同時(shí)間滅菌處理，篩選出不同發(fā)育時(shí)期花序最佳的滅菌時(shí)間。結(jié)果表明，盛花期的無(wú)菌花序獲得率最高為64.44％，最佳滅菌時(shí)間為10min。
　

2、　(2)白鶴芋花序體細(xì)胞胚誘導(dǎo)試驗(yàn)，通過對(duì)6-BA、KT和NAA進(jìn)行正交分析，篩選出最優(yōu)激素組合6-BA5.0 mg/L+KT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L，通過極差分析比較各激素間的影響，6-BA對(duì)體胚誘導(dǎo)影響最顯著。采用二因素重復(fù)試驗(yàn)對(duì)不同發(fā)育時(shí)期及取材部位體胚誘導(dǎo)進(jìn)行研究，盛花期形態(tài)學(xué)下端的體胚誘導(dǎo)率最高。采用單因素3水平完全隨機(jī)試驗(yàn)，探究光周期對(duì)體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，先黑暗培養(yǎng)15天后轉(zhuǎn)到光暗比為12∶12

3、，為白鶴芋花序體胚誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)條件。
　　2.白鶴芋快繁技術(shù)的研究
　　(1)體細(xì)胞胚增殖培養(yǎng)研究中，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)最佳體胚增殖培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，確定6-BA5 mg/L+ZT0.3 mg/L+NAA0.2 mg/L為最優(yōu)白鶴芋花序體胚增殖培養(yǎng)基配方。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，開展蔗糖和葡萄糖培養(yǎng)試驗(yàn)，當(dāng)蔗糖濃度為45g/L、葡萄糖濃度為30g/L時(shí)，體胚增殖達(dá)到最佳的效果。在繼代頻率影響研究中，繼代周期控制在30-40d體

4、胚的增殖效果最佳。
　　(2)花序體胚萌發(fā)培養(yǎng)研究，綜合比較激素、活性炭、蔗糖等因素，探討出最佳白鶴芋花序體胚萌發(fā)的培養(yǎng)方案。確定IBA0.1 mg/L+GA30.4 mg/L+蔗糖30g/L為最佳體胚萌發(fā)激素組合。添加6g/L活性炭，體胚萌發(fā)率可提高4.80％。
　　(3)植株再生轉(zhuǎn)化體系建立試驗(yàn)，通過對(duì)6-BA、IBA和GA3正交分析，篩選出最佳的植株再生轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為6-BA0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L+

5、GA30.5 mg/L，植株轉(zhuǎn)化率達(dá)88.56％，同時(shí)得到最優(yōu)芽繁殖激素組合6-BA1.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+ GA30.3 mg/L，芽繁殖系數(shù)達(dá)到3.71。3.白鶴芋試管苗移栽及催花技術(shù)研究
　　試管苗煉苗試驗(yàn)結(jié)果表明，煉苗6d后開蓋2d，移栽于穴盤并覆膜14d，白鶴芋試管苗成活率達(dá)94.44％。不同濃度GA3白鶴芋催花試驗(yàn)，研究結(jié)果表明，當(dāng)GA3濃度達(dá)到250mg/L時(shí)，白鶴芋催花效果最好，催花率達(dá)到66.6