電擊死大鼠心臟超微結(jié)構(gòu)及HSP70、HIF-1α、表達變化的研究.pdf

1、目的:因電流作用導(dǎo)致人體死亡稱電擊死。電擊死典型尸體征象有電流斑、電灼傷痕、電擊花紋及皮膚金屬化等。電流斑是診斷電擊死的主要形態(tài)學(xué)依據(jù)，尋找并提取電流損傷的皮膚、鏡檢確認電流斑是診斷電擊死的主要依據(jù)。但在實際案例中并非每一例電擊死都存在電流斑，且死后電擊也可以出現(xiàn)電流斑。目前缺乏電流斑電擊死的診斷以及生前和死后電擊的鑒別是法醫(yī)病理學(xué)鑒定的難點，也是法醫(yī)學(xué)亟待解決的問題，該類案件主要是結(jié)合案情、受害人群、觸電現(xiàn)場及尸體檢驗等作出綜合判斷。

2、而法醫(yī)病理學(xué)尚缺乏較為特異性的形態(tài)學(xué)或其他方面的指標為診斷提供依據(jù)。
　　本實驗在建立大鼠電擊死模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用HE染色、透射電鏡及免疫組織化學(xué)染色方法，觀察電擊死引起心臟超微結(jié)構(gòu)及熱休克蛋白70(HSP70)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達的變化，探討其在電擊死與死后電擊中的不同改變，為電擊死的法醫(yī)病理學(xué)鑒定提供一定的診斷依據(jù)。
　　方法:健康Sprague-Dawley(SD)大鼠56只，體重220g±10g，

3、雌雄不限，適應(yīng)環(huán)境喂養(yǎng)7天，隨機分7組，每組8只。
　　對照組、死后30分鐘對照組、死后60分鐘對照組:對照組采用1ml水合氯醛腹腔注射麻醉后仰臥位固定在鼠架上，將對側(cè)的前后肢用脫毛膏做去毛處理，斷頭處死大鼠，開胸后取其心臟，局部取材部分切成（0.5-1mm3）小塊2-3塊，放入裝有4％戊二醛的小瓶中，備行透射電鏡觀察。將剩余心臟部分及肢體局部皮膚放入4％的多聚甲醛中固定，制備石蠟切片，進行HE染色觀察，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察心

4、臟HSP70、HIF-1α表達情況。死后30分鐘對照組和死后60分鐘對照組用同樣方法處死大鼠，室溫放置至相應(yīng)時間點后取其心臟和皮膚，觀察指標同對照組。
　　電擊死組:采用1ml水合氯醛腹腔注射麻醉后將大鼠仰臥位固定在鼠架上，將對側(cè)的前后肢用脫毛膏做去毛處理，并連接于自制的電擊設(shè)備，閉合電路后用220V電壓電擊大鼠2分鐘致死，關(guān)閉電源后撤去電擊設(shè)備后即刻取材，實驗內(nèi)容同對照組。
　　死后電擊組、死后30分鐘電擊組、死后60分鐘

5、電擊組:采用1ml水合氯醛腹腔注射麻醉后仰臥位固定在鼠架上，斷頭處死大鼠，做去毛處理后，死后電擊組即刻用220V電壓電擊大鼠2分鐘，關(guān)閉電源后撤去電擊設(shè)備即刻取材，實驗內(nèi)容同對照組。死后30分鐘電擊組與死后60分鐘電擊組分別于處死后30分鐘、60分鐘用220V家用電壓電擊大鼠2分鐘，關(guān)閉電源后撤去電擊設(shè)備即刻取材，實驗內(nèi)容同上。
　　數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差(Mean±SD)”表示，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，各組均數(shù)的

6、比較行單因素方差分析(ANOVA)，用最小顯著差法(least significant difference，LSD)作兩兩比較，以P＜0.05為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1.電擊大鼠的一般表現(xiàn)與電擊處皮膚觀察
　　電擊死組大鼠通電后出現(xiàn)強直性抖動，尾巴高高翹起，有淡黃色尿液排出，部分大鼠有大便排出，肢體電擊處有燒灼表現(xiàn);電流斑與接觸導(dǎo)體走行一致，色呈灰黃，質(zhì)較硬、干燥，中央凹陷，周圍稍隆起，邊緣鈍圓，與周圍

7、組織分界清晰。死后電擊組大鼠也出現(xiàn)強直性抖動，尿液及大便排出。電流斑同樣與接觸導(dǎo)體走行一致，質(zhì)較硬、干燥，中央凹陷，與周圍組織分界清楚。
　　2.HE染色結(jié)果
　　2.1皮膚HE染色
　　對照組HE染色光鏡下觀察見表皮細胞無異常，排列整齊，細胞和胞核無極性化。
　　電擊死組光鏡下觀察見表皮細胞融合變薄、致密、著色深，細胞呈極性化改變，以基底層的細胞最為明顯，基底層細胞及細胞核染色深，縱向伸長并且嚴重扭曲變形。

8、r>　　死后電擊組光鏡下觀察見表皮細胞融合變薄，致密，染色較深，細胞間界限不清，表皮細胞胞漿均質(zhì)化，表皮下空泡形成，基底層細胞及細胞核染色深，縱向伸長并且嚴重扭曲變形，有核流征表現(xiàn)。
　　2.2心臟HE染色
　　對照組的心肌組織結(jié)構(gòu)清晰可見，心肌細胞大小一致，以心肌動靜脈為中心呈索狀整齊排列，死后30分鐘對照組、死后60分鐘對照組的心肌細胞染色僅見部分區(qū)域有水腫表現(xiàn)，局部嗜酸性變。
　　電擊死組心肌細胞間質(zhì)有水腫表現(xiàn)，

9、胞漿染色變淡，胞核染色變淡、增大，心肌層有斷裂及收縮帶壞死的改變，心肌細胞有嗜酸性變。
　　死后電擊組的心肌細胞有輕度的水腫，胞漿染色變淡，胞核染色變淡、增大，部分心肌細胞有嗜酸性變;死后30分鐘電擊組、死后60分鐘電擊組的心肌細胞染色僅見部分區(qū)域有水腫表現(xiàn)，局部嗜酸性變。死后電擊各組心肌無斷裂及收縮帶壞死。
　　3.心臟透射電鏡觀察
　　對照組電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)肌纖維間質(zhì)無異常，血管周圍間質(zhì)無水腫，血管內(nèi)皮細胞吞飲小泡排

10、列整齊，毛細血管周圍無異常表現(xiàn)，結(jié)構(gòu)清楚，Z線M線清晰、無斷裂。
　　電擊死組電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)肌原纖維斷裂并且溶解消失，間質(zhì)出現(xiàn)水腫，線粒體嵴和膜消失并溶解，肌纖維間質(zhì)水腫，血管周圍間質(zhì)出現(xiàn)水腫，血管內(nèi)皮細胞吞飲小泡排列密集，毛細血管周圍水腫，結(jié)構(gòu)模糊混亂，Z線M線模糊排列紊亂可見斷裂。
　　死后電擊組電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細胞核邊移，肌纖維間質(zhì)水腫，線粒體嵴和膜消失并溶解，Z線M線模糊排列紊亂。
　　4.免疫組織化學(xué)結(jié)果

11、>　　HIF-1α蛋白在心肌細胞內(nèi)的表達為胞漿著色，對照組、死后30分鐘對照組、死亡60分鐘對照組心肌細胞陽性染色較少，各組之間無明顯差異。電擊死組鏡下觀察心肌細胞的胞漿染色增強，與對照組比較有明顯增高，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）;死后電擊組有陽性表達，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，死后30分鐘電擊組與死后60分鐘電擊組與對照組比較無明顯差異。
　　HSP70蛋白在心肌細胞的表達為胞漿著色，對照組、死后30分鐘

12、對照組、死后60分鐘對照組偶見胞漿黃染出現(xiàn)，陽性染色并不明顯，各組之間無明顯差異。電擊死組細胞黃色增強，與對照組比較有明顯增高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001);死后電擊組有陽性表達，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），死后30分鐘電擊組與死后60分鐘電擊組與對照組比較無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　生前電擊和死后電擊均可出現(xiàn)電流斑，所以其不能作為區(qū)分生前電擊與死后電擊的依據(jù)。而電擊死心臟HSP70、HIF-1α蛋白的