失血性休克誘發(fā)兔心肌損傷時縫隙連接蛋白43表達的變化及丙泊酚的干預效應.pdf

1、目的：失血性休克(Hemorrhagicshock,HS)常見于嚴重創(chuàng)傷和手術出血，是臨床上十分危急的病癥，若未經(jīng)及時治療，可導致死亡。HS主要以全身血容量驟減、組織灌注減少、細胞缺氧、無氧代謝增加及乳酸堆積，氧自由基和代謝產(chǎn)物生成增多為主要特征，造成細胞氧化應激損傷，嚴重者可導致器官功能障礙，甚至衰竭。盡管心肌細胞對缺血缺氧有較強的耐受力，但嚴重休克時仍會表現(xiàn)為收縮功能下降、心輸出量減少，進而加重其他臟器損傷。丙泊酚是臨床常用的靜脈麻

2、醉藥，具有對抗氧自由基和抑制細胞凋亡的作用。研究表明丙泊酚對失血性休克和缺血-再灌注心肌損傷具有明顯的保護作用?？p隙連接蛋白43(Connexin43,Cx43)是心肌細胞縫隙連接的主要蛋白，Cx43的空間分布、數(shù)量及磷酸化異常均可影響縫隙連接電耦聯(lián)，影響心肌同步收縮功能。研究表明，急性心肌缺血后Cx43會發(fā)生重構，主要表現(xiàn)為蛋白表達下降，分布模式以及磷酸化的改變。本研究擬探討丙泊酚對失血性休克兔心肌損傷時Cx43表達的影響，為明確丙泊

3、酚心肌保護的作用機制提供參考。
　　方法：健康清潔級雄性新西蘭白兔24只，5～7月齡，體重2.5～3.0kg，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。采用隨機數(shù)字表法，將其分為3組(n=8)：假手術(S)組、失血性休克(HS)組及丙泊酚處理(P)組。
　　取兔稱重后置于兔籠中沿右側耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉30mg/kg，麻醉成功后將兔仰臥位固定于手術臺上。手術部位備皮消毒，1%利多卡因浸潤麻醉后剪開頸部正中皮膚，分離氣管，行氣管切

4、開插管術(ID=3.0mm)并保留自主呼吸；分離右側頸總動脈，用24G套管針插入右側頸總動脈并用絲線固定，連接M1567A有創(chuàng)血壓測壓套裝，再與PhilipsG60多功能監(jiān)護儀連接持續(xù)監(jiān)測動脈血壓（BP）和平均動脈壓（MAP）。1%利多卡因浸潤麻醉后于兔左、右側股三角區(qū)分別斜行3cm剪開皮膚，暴露并分離雙側股動靜脈，用24G套管針分別置入左側股動脈和右側股靜脈并用絲線固定，連接三通用于放血、采集動脈血樣和輸血、給藥。置管完成后靜脈給予肝

5、素鈉3mg/kg。S組僅行氣管切開插管術、右側頸總動脈和股動靜脈穿刺置管術，不放血；P組于放血前10min經(jīng)右側股靜脈注射丙泊酚5mg/kg，并用微量注射泵以20mg·kg-1·h-1的速度持續(xù)輸注至休克后120min；S組及HS組靜脈輸注等容量生理鹽水。
　　采用Wigger’s改良法經(jīng)左側股動脈放血，10min內使MAP降至40mmHg，放血量約為全身血容量的30~50%，觀察兔血壓波動，通過放血和回輸血液維持MAP在35~4

6、5mmHg之間以達休克狀態(tài)并維持120min，制備失血性休克動物模型。
　　于放血前即刻(T0)、休克30min(T1)、60min(T2)、90min(T3)和120min(T4)采集動脈血樣測定各時間點血漿cTnI濃度及動脈血乳酸水平。于T4采血后，連接HX-200動物呼吸機行機械通氣，快速打開胸腔，取心尖部心肌組織并一分為二，一半置于EP管中液氮凍存24h，再轉?80oC冰箱保存待測；另一半組織用4℃4%多聚甲醛溶液固定待測

7、。
　　采用ELISA法測定兔血漿cTnI濃度；采用自動血氣分析儀檢測動脈血乳酸水平；取4%多聚甲醛溶液固定的心肌組織，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察心肌病理損傷并行損傷評分；取?80℃冰箱凍存的心肌組織采用Westernblot法檢測兔心肌組織Cx43表達。
　　結果：
　　1、與S組比較，HS組與P組兔血漿cTnI濃度升高（P<0.05）；與HS組比較，P組兔血漿cTnI濃度降低（P<0.05）；與T

8、0比較，HS組和P組T1-4時兔血漿cTnI濃度逐漸升高（P<0.05）。
　　2、與S組比較，HS組與P組兔動脈血乳酸水平升高（P<0.05）；與HS組比較，P組兔動脈血乳酸水平降低（P<0.05）；與T0比較，HS組和P組T1-4時兔動脈血乳酸水平逐漸升高（P<0.05）。
　　3、S組心肌細胞形態(tài)正常，肌纖維排列整齊，細胞核均勻一致；HS組心肌細胞腫脹，纖維排列不規(guī)則或斷裂，間質內有大量炎性細胞浸潤，胞核崩解；P組心肌

9、細胞輕度變性，少量心肌纖維斷裂，細胞間隙略增寬，病理損傷較HS組減輕。與S組比較，HS組和P組心肌損傷評分升高(P<0.05)；與HS組比較，P組心肌損傷評分降低(P<0.05)。
　　4、與S組比較，HS組和P組心肌Cx43含量減少(P<0.05)；與HS組比較，P組心肌Cx43含量增加(P<0.05)。
　　結論：
　　1、股動脈放血法可成功制備失血性休克動物模型。
　　2、失血性休克可引起心肌損傷并使心肌細