阿司匹林對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞SOX7表達和Wnt-β-catenin信號通路的影響.pdf

1、背景與目的：
　　卵巢癌是全球范圍內(nèi)最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤性疾病之一，其發(fā)病率僅次于鱗狀細胞宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌而位居第三位，但其死亡率極高，接近65％，位居各類婦科腫瘤的首位，其中約半數(shù)以上患者因該病復發(fā)或在治療過程中死亡。上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤疾病中發(fā)病率最高的病理類型，約占總發(fā)病例數(shù)的85%~90%，并且患者極易發(fā)生死亡，盡管70%以上的患者均接受了外科手術治療和標準的化學治療，5年生存率依然很低。這些可能與卵巢癌的高度易轉

2、移性、某些細胞存在化學治療抵抗性以及卵巢復雜的胚胎發(fā)育、組織解剖和內(nèi)分泌功能有關。因此，深入研究卵巢癌的病因及發(fā)病分子機制對于臨床卵巢腫瘤疾病的診斷、防治和預后工作具有深遠的意義。
　　阿司匹林是一種臨床上使用非常廣泛的非甾體抗炎藥，常用于骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、各種發(fā)熱和疼痛、動靜脈血栓形成、凝血功能異常等疾病的治療。到現(xiàn)在為止，阿司匹林抗腫瘤作用的具體分子機制仍然未清晰。此外，阿司匹林對多種人類腫瘤疾病的預防和治療均有著積極

3、的輔助意義，其在抗腫瘤研究中的巨大潛力應引起廣泛的重視。
　　SOX7基因定位于人類染色體8p23.1,包括兩個外顯子和一個內(nèi)含子，具有HMG-box區(qū)域氨基酸序列高度保守性的特點，編碼由377個氨基酸構成的小分子蛋白，參與調(diào)控早期的胚胎發(fā)育和內(nèi)胚層分化等重要生物過程。染色體8p等位基因缺失是人類腫瘤疾病中最常見的細胞基因改變之一，缺失引起的抑癌基因失活是導致癌變發(fā)生的重要誘因。而SOX7基因恰恰位于這一區(qū)域，因此推測SOX7基因

4、可能作為一種抑癌基因參與了腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展。Wnt/β-catenin信號通路是Wnt基因參與調(diào)控的重要信號傳導系統(tǒng)中最常見的一種信號通路，在進化上具有高度的保守性，其機制研究相對較清楚，在多種人類疾病特別是腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要調(diào)控作用，并且Wnt/β-catenin通路中某些基因的沉默、突變或是缺少均可以引起該信號通路的異?；罨?，從而引起腫瘤的疾病的發(fā)生。SOX7基因可能通過對Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)節(jié)作用發(fā)

5、揮其在腫瘤細胞增殖、發(fā)育和凋亡等生理進程中的關鍵性作用，但其具體分子調(diào)節(jié)機制仍仍有待研究；且SOX7基因和Wnt/β-catenin信號通路基因在上皮性卵巢癌中的表達情況和分子作用機制以及兩者之間的相互影響在國內(nèi)外文獻中罕見報道。
　　本研究采用實時熒光定量PCR技術檢測SOX7基因、Wnt/β-catenin信號通路下游靶基因β-catenin和cyclinD1分別在卵巢癌組織和正常卵巢組織中的表達情況，以及使用不同濃度阿司匹林

6、刺激人上皮性卵巢癌 SKOV3細胞后基因SOX7、β-catenin和cyclinD1分別在腫瘤細胞中表達水平的變化，同時利用MTT法檢測不同濃度阿司匹林刺激對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞增殖活性的影響。旨在探索SOX7基因與Wnt/β-catenin信號通路在上皮性卵巢癌發(fā)生中的作用及具體分子機制。
　　方法：
　?。?）采用實時熒光定量PCR技術檢測SOX7、Wnt/β-catenin信號通路下游靶基因β-catenin

7、和cyclinD1分別在卵巢癌組織和正常卵巢組織中表達水平的差異。
　　（2）使用不同濃度阿司匹林（0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L）作用于人上皮性卵巢癌細胞株SKOV3，采用實時熒光定量PCR法檢測基因SOX7、β-catenin和cyclinD1分別在腫瘤細胞中表達水平的變化。
　?。?）采用MTT法檢測不同濃度阿司匹林刺激對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞增殖活性的影響，并

8、計算腫瘤細胞的抑制率。
　　采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，定量資料以均數(shù)±標準差（-x±s）表示，符合正態(tài)分布的兩組數(shù)據(jù)間比較采用獨立樣本t檢驗，正態(tài)分布的多組數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，多個樣本均數(shù)之間的兩兩比較使用LSD-t檢驗，兩組數(shù)據(jù)變量的關聯(lián)性分析采用Pearson相關。以α=0.05作為檢驗水準。
　　結果：
　　1.SOX7、β-catenin和cyc

9、linD1在上皮性卵巢癌患者腫瘤組織和正常卵巢組織中的含量:
　　SOX7、β-catenin和cyclinD1在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌患者腫瘤組織中的表達情況分別是：SOX7，6.102±0.781 vs1.701±1.104, t=3.614, P=0.001；β-catenin，2.312±0.267 vs9.214±0.351, t=13.651, P<0.001；cyclinD1，3.021±0.981 vs6.70

10、1±1.216, t=5.967, P<0.001。
　　2.阿司匹林刺激后人上皮性卵巢癌 SKOV3細胞內(nèi)基因 SOX7、CyclinD1和β-catenin的表達水平變化：
　　使用不同濃度的小劑量阿司匹林刺激SKOV3細胞，基因SOX7的表達水平隨刺激濃度增加而依次升高（分別為0.725±0.101 vs0.947±0.011 vs1.923±0.126 vs2.857±0.218 vs4.402±0.086，F(xiàn)=12

11、.151，P<0.001），而基因β-catenin和cyclinD1的表達水平隨刺激濃度增加而依次降低（分別為β-catenin：1.759±0.334 vs1.644±0.645 vs0.963±0.553 vs0.705±0.618 vs0.643±0.539，F(xiàn)=6.214， P<0.001；cyclinD1：2.313±0.142 vs2.144±0.055 vs1.542±0.033 vs0.941±0.018 vs0.32

12、3±0.012，F(xiàn)=4.903，P<0.001)。
　　3.阿司匹林刺激后SOX7、CyclinD1和β-catenin表達水平的相關性分析
　　阿司匹林刺激后，SOX7 mRNA表達量與CyclinD1 mRNA表達量具有顯著的相關性（r=-0.978，P<0.05）；SOX7 mRNA表達量與β-catenin mRNA表達量具有顯著的相關性（r=-0.983，P<0.05）；CyclinD1 mRNA表達量與β-cat

13、enin mRNA表達量具有顯著的相關性（r=0.986，P<0.05）。
　　4.MTT法檢測不同濃度阿司匹林對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞增殖活性的影響：
　　小劑量阿司匹林對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞的增殖活性具有明顯的抑制作用（分別為0vs0.935±0.065 vs11.784±2.743 vs20.192±3.441 vs32.462±5.821，F(xiàn)=20.481，P=0.000），并且隨著濃度的升高，阿司匹林

14、對細胞增殖活性的抑制作用越明顯，對細胞的抑制率越大，細胞凋亡的越多，具有濃度依賴性趨勢。
　　結論：
　　1．SOX7基因可能作為一種抑癌基因參與EOC的發(fā)病機制，且EOC內(nèi)存在Wnt/β-catenin信號通路的異?；罨?。
　　2．阿司匹林可顯著上調(diào)人上皮性卵巢癌 SKOV3細胞中SOX7，下調(diào)CyclinD1和β-catenin，并抑制SKOV3細胞的增殖活性，促進凋亡發(fā)生，有機會作為一種新的抗腫瘤藥物用于臨床腫