基于氧化還原電位建立測(cè)定血清抗氧化能力的方法.pdf

1、目的:
　　本文基于氧化還原反應(yīng)原理和氧化還原電位(Oxidation Reduction PotentialORP)，建立了三種準(zhǔn)確，靈敏，精密度良好的測(cè)定人血清抗氧化能力的方法，以達(dá)到對(duì)機(jī)體氧化還原狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)的目的。運(yùn)用所建立的三種方法對(duì)2型糖尿病(T2DM)人的血清抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定，采用等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)分析2型糖尿病人CETP基因TaqIB位點(diǎn)的多態(tài)性，旨在探討機(jī)體抗氧化能力及CETP基因TaqI

2、B多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性，評(píng)估兩者對(duì)2型糖尿病的危險(xiǎn)性。
　　方法:
　　1. 基于氧化還原電對(duì)(I2/KI)濃度比的對(duì)數(shù)與氧化還原電位（ORP）呈線性關(guān)系，血清與已知固定濃度比的I2/KI電對(duì)液反應(yīng)后，電對(duì)液ORP值發(fā)生改變建立方法1。用血清和維生素C與I2/KI電對(duì)液進(jìn)行反應(yīng)，評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確性。按照NCCLS的EP5文件評(píng)價(jià)方法1的精密度。并測(cè)定糖尿病人的血清抗氧化能力來(lái)驗(yàn)證該方法潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　2.

3、 基于氧化還原電對(duì)(Fe3+/Fe2+)濃度比的對(duì)數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系，血清與已知固定濃度比的Fe3+/Fe2+電對(duì)液反應(yīng)后，電對(duì)液ORP值發(fā)生改變建立方法2。用血清和維生素C與Fe3+/Fe2+電對(duì)液進(jìn)行反應(yīng)，評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確性。多因素線性回歸分析實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各因素對(duì)方法2的影響。并測(cè)定糖尿病人的血清抗氧化能力來(lái)驗(yàn)證該方法的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　3. 基于氧化劑過(guò)氧化氫(H2O2)濃度的對(duì)數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈

4、線性關(guān)系，血清與已知固定濃度的過(guò)氧化氫反應(yīng)后，電對(duì)液ORP值發(fā)生改變來(lái)建立方法3。用血清和維生素C與過(guò)氧化氫進(jìn)行反應(yīng)，評(píng)價(jià)方法3的準(zhǔn)確性。多因素線性回歸分析實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各因素對(duì)方法3的影響。并測(cè)定糖尿病人的血清抗氧化能力來(lái)驗(yàn)證該方法的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　4. 從醫(yī)院采集30例2型糖尿病人和30例健康體檢者的血清，運(yùn)用所建立的三種方法測(cè)定這兩組人群的血清抗氧化能力。采用等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)檢測(cè)2型糖尿病人和健康體

5、檢組CETP基因TaqIB位點(diǎn)的多態(tài)性，探討機(jī)體抗氧化能力及CETP基因TaqIB多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1. 氧化還原電對(duì)(I2/KI)濃度比的對(duì)數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系(R2=0.9970)。在電對(duì)液存在的條件下，血清與ORP呈線性關(guān)系(R2=0.9997)，維生素C與ORP呈線性關(guān)系(R2=0.9980)。精密度結(jié)果為100％血清水平批內(nèi)CV為0.20％，批間CV為0.21％，天間CV

6、為0.43％;50％血清水平批內(nèi)CV為0.11％，批間CV為0.12％，天間CV為0.39％。糖尿病組和健康體檢組的ORP值，糖尿病組為385.40±5.93 mv，正常對(duì)照組為380.72±5.54mv。結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2. 氧化還原電對(duì)(FeWFe2+)濃度比的對(duì)數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系(R2=0.9987)。在電對(duì)液存在的條件下，血清與ORP呈線性關(guān)系(R2=0.9700)，維生素C與OR

7、P呈線性關(guān)系(R2=0.9960)。多因素線性回歸分析實(shí)驗(yàn)，血清、Fe3+、Fe2+三個(gè)變量對(duì)于ORP值的貢獻(xiàn)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中Fe3+與ORP呈正相關(guān)，其貢獻(xiàn)最大(β=0.7890)，血清和Fe2+與ORP呈反相關(guān)。糖尿病組和健康體檢組的ORP值，糖尿病組為399.17±10.99mv，正常對(duì)照組為392.60±8.36mv，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3. 氧化劑過(guò)氧化氫(H2O2)的濃度的對(duì)

8、數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系(R2=0.9991)。在過(guò)氧化氫存在的條件下，血清與ORP呈線性關(guān)系(R2=0.9890)，維生素C與ORP呈線性關(guān)系(R2=0.9750)。多因素線性回歸分析實(shí)驗(yàn)，血清、過(guò)氧化氫、重復(fù)次數(shù)三個(gè)變量中，血清和過(guò)氧化氫對(duì)于ORP值的貢獻(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，重復(fù)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.061)。其中血清與ORP呈負(fù)相關(guān)，貢獻(xiàn)最大(β=-0.757)，過(guò)氧化氫與ORP呈正相關(guān)。糖尿病組和健康

9、體檢組的ORP值，糖尿病組為384.35±11.23mv，正常對(duì)照組為380.67±8.98mv，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)。
　　4. 三種方法測(cè)定的30例2型糖尿病人血清抗氧化能力明顯低于30例健康體檢者血清抗氧化能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在兩組中，TaqIB位點(diǎn)可檢測(cè)出B1B1，B1B2，B2B2三種基因型，基因型頻率(x2=1.153)及等位基因頻率(x2=0)在兩組間分布均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

10、)。 Logistic回歸分析表明CETP基因TaqIB突變位點(diǎn)與2型糖尿病無(wú)明顯相關(guān)，血清抗氧化能力為2型糖尿病的危險(xiǎn)因素(OR=1.029,95％CI:1.011～1.048)。
　　結(jié)論:
　　1. 初步建立了三種利用加入氧化還原電對(duì)液或過(guò)氧化氫并結(jié)合氧化還原電位(ORP)測(cè)定血清抗氧化能力的方法，方法適用于測(cè)定人血清抗氧化能力，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　2. 2型糖尿病人血清抗氧化能力明顯低于健康體檢人群，