水稻紋枯病菌菌核形成過(guò)程中相關(guān)基因的表達(dá)分析與克隆.pdf

1、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）是一類十分重要的植物病原真菌，寄主范圍廣泛，可引起包括水稻、小麥、玉米等重要作物在內(nèi)的多種作物菌核病的發(fā)生，危害十分嚴(yán)重。而關(guān)于水稻紋枯病致病病原菌菌核的形成和發(fā)育機(jī)理，目前國(guó)內(nèi)外研究已經(jīng)有較多報(bào)道，但主要集中于營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境因子等對(duì)菌核形成的影響，而在菌核形成的分子生物學(xué)研究方面，盡管有了一些有益的探索，但至今仍缺乏深入的研究。許多與立枯絲核菌菌核形成的相關(guān)基因有待進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。

2、　　 本研究以水稻紋枯病菌（Rhizoctonia solani AG-1 IA）菌株GD118不同生長(zhǎng)時(shí)期的總RNA為材料，以18S rRNA作為內(nèi)參基因，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室抑制消減雜交(SSH)已獲得的立枯絲核菌基因片段的ESTs序列設(shè)計(jì)引物，采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)A、B、C、E、F基因（雙組分反應(yīng)調(diào)節(jié)子、激活巨噬細(xì)胞糖蛋白、胞外金屬?gòu)椓Φ鞍酌?、親環(huán)蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊泡蛋白ERV29）的表達(dá)，以期找到水稻紋枯病菌菌核形成中的差異表達(dá)基因

3、。結(jié)果表明:從菌核開(kāi)始形成到菌核成熟的過(guò)程中，這五個(gè)基因的表達(dá)量逐漸降低，且菌核成熟時(shí)表達(dá)量最低，但是成熟后這些基因的表達(dá)量迅速恢復(fù)到之前表達(dá)量，并且之后表達(dá)量基本保持不變。這表明這五個(gè)基因在水稻紋枯病菌菌核形成的不同時(shí)期的表達(dá)有顯著差異，從而提示這五個(gè)基因可能受菌核形成過(guò)程中脅迫條件的誘導(dǎo)表達(dá)。
　　 為了進(jìn)一步了解差異表達(dá)基因在水稻紋枯病菌中的生物學(xué)功能，我們根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室采用抑制消減雜交(SSH)已獲得的CYP片段基因序列設(shè)

4、計(jì)引物，然后通過(guò)RACE技術(shù)分別獲得基因3'端包含多聚A尾的序列和5'端序列，最后獲得了水稻紋枯病菌CYPcDNA全序列。水稻紋枯病菌CYP cDNA全長(zhǎng)為684bp，經(jīng)序列分析表明，含有一個(gè)長(zhǎng)度為250bp的5'UTR，315bp的開(kāi)放閱讀框和119bp的3'UTR，命名為Rs-CYP。其開(kāi)放閱讀框編碼的蛋白質(zhì)由104個(gè)氨基酸組成，這段氨基酸中含有多個(gè)保守區(qū)域，為親環(huán)蛋白所特有。根據(jù)BLAST分析結(jié)果，顯示該氨基酸序列與多種真菌中的C

5、YP基因具有較高的同源性，同源性均大于78％，表明我們已經(jīng)成功她克隆到了Rhizoctonia solaniAG-1 IA的CYP基因。序列同源性分析表明， Rhizoctonia solani AG-1 IA的Rs-CYP基因與Moniliophthora perniciosa的CYP基因親緣關(guān)系最近。Rs-CYP基因的克隆和測(cè)序?yàn)閷?lái)研究其在水稻紋枯病菌中的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)，從而為進(jìn)一步研究立枯絲核菌菌核形成的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。