喜鹽草黃酮類化合物的提取、純化及抗氧化活性研究.pdf

1、喜鹽草（Halophila ovalis），多年淺海生沉水草本，屬被子植物門，單子葉植物綱。隸屬于沼生目((Helobiae)，水鱉科(Hydrocharitacea)，喜鹽草屬（HalophilaThou.）。喜鹽草是海草床的重要組成部分。目前，國內(nèi)尚未有關(guān)于喜鹽草黃酮的報道，對喜鹽草的研究主要集中在分類學(xué)、形態(tài)學(xué)和生理學(xué)等方面。
　　黃酮類化合物是一類自然界中廣泛存在的化合物。研究表明，黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，包括抗氧

2、化、抗衰老、抗突變、抗腫瘤、抗菌等。但是對于黃酮類化合物的研究一般只限于陸生高等植物，海洋中的高等植物尚并未被充分開發(fā)利用。
　　本文將海洋高等植物喜鹽草作為研究對象，主要研究其黃酮類化合物的提取工藝、純化方法，并研究了喜鹽草黃酮的抗氧化活性，主要研究結(jié)果如下:
　　首先對喜鹽草的基本成分進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)喜鹽草是一種蛋白含量高(11.66％)、低脂肪(1.16％)并且富含礦質(zhì)元素(18.11％)的天然資源。在已測定的15中氨

3、基酸中，必需氨基酸有7種，占氨基酸總量的34.70％。在必需氨基酸中，以纈氨酸含量最高，蛋氨酸含量最低。在非必需氨基酸中，谷氨酸含量最高，以組氨酸含量最低。呈味氨基酸豐富。
　　其次進(jìn)行了黃酮類化合物的提取試驗。以乙醇作為浸提液，研究了傳統(tǒng)工藝浸提法、超聲輔助提取法和纖維素酶輔助提取法，通過單因素實驗和正交試驗得出這三種提取方法對喜鹽草黃酮類化合物的最佳提取條件，并對其最大得率進(jìn)行比較。傳統(tǒng)浸提工藝最佳提取條件:乙醇濃度為65％，

4、提取溫度為70℃，提取時間為4h，料液比為1∶40(g/mL)，喜鹽草的黃酮類化合物得率為1.28％。超聲輔助提取工藝的最佳提取條件:乙醇濃度為55％，超聲功率為420W，超聲時間為8min，喜鹽草的黃酮類化合物得率為1.73％。纖維素酶輔助提取工藝的最佳提取條件:酶解溫度60℃，酶解pH為5.5，酶解時間60min，酶用量為3％，喜鹽草黃酮類化合物的得率為2.10％。結(jié)果表明，纖維素酶輔助提取工藝優(yōu)于其他兩種工藝。
　　利用有機(jī)

5、溶劑萃取法得到了乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物，后者黃酮純度更高，且更符合黃酮的紫外吸收特征，所以作為分離純化的主要研究對象。選擇5種大孔吸附樹脂，通過靜態(tài)吸附和解吸實驗，選定最優(yōu)樹脂AB-8;最后通過靜態(tài)實驗確定了最佳純化工藝條件:樣液pH為3，樣液質(zhì)量濃度為1.20mg/mL，吸附溫度和解吸溫度為25℃，洗脫液乙醇濃度為75％。在最佳純化條件下，正丁醇相萃取物的黃酮類化合物純度由原來的28.34％上升至47.28％，提高了1.7倍。經(jīng)高

6、效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜鑒定，純化后的喜鹽草黃酮含有芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷。
　　文章最后研究了喜鹽草乙酸乙酯萃取物、正丁醇相萃取物、大孔樹脂純化物與芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷的抗氧化活性，主要包括還原能力、清除羥基自由基能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除DPPH自由基和亞硝基能力的測定。兩種黃酮單體的還原力略低于VC，說明還原力接近于VC。在清除超氧陰離子