金銀花葉中黃酮類化合物的提取、純化及抗氧化研究.pdf

1、金銀花（Lonicera japonica Thunb.）為常見中草藥之一，具有抑菌消炎、保肝利膽、清熱解毒等功效。金銀花種植業(yè)會產(chǎn)生大量金銀花葉，葉片價(jià)錢實(shí)惠且采收便利，卻被隨意丟棄，如果將葉片收集起來提取其中的有效成分，不失為一種充分合理利用自然資源的好方法。金銀花葉中富含多種生物活性成分，其中黃酮含量最高。金銀花葉黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化、抗癌及抑菌等藥理功能，因此，對金銀花葉資源的研究具有一定的經(jīng)濟(jì)效益及社會價(jià)值。本文對金銀花葉黃酮

2、的提取、純化和抗氧化進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下：
　?。?）首先研究了超聲波輔助乙醇提取金銀花葉黃酮的工藝。以總黃酮提取率為指標(biāo)，在液料比、提取溫度、乙醇體積分?jǐn)?shù)和超聲功率等單因素實(shí)驗(yàn)條件的基礎(chǔ)上，經(jīng)過二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化金銀花葉黃酮的超聲輔助提取工藝條件。結(jié)果表明，在超聲功率250W、提取溫度46℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)60％及液料比65:1（mL/g）的條件下金銀花葉黃酮提取率為最大，高達(dá)15.67%。
　　（2）對金銀花

3、葉黃酮的純化特性及工藝進(jìn)行研究。從14種大孔樹脂中篩選出NKA-II樹脂作為最佳吸附樹脂，經(jīng)過靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)和動態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)得出：NKA-II型樹脂吸附金銀花葉黃酮的過程符合準(zhǔn)二級動力學(xué)模型；吸附等溫線與Freundlich和Langmuir函數(shù)擬合程度較高；在上樣液質(zhì)量濃度為2.17 mg/mL、上樣液pH為2.82、上樣流速1.96 BV/h條件下上柱，以體積分?jǐn)?shù)為75.36%的乙醇4.15 BV在洗脫流速1.47 BV/h的條件下解吸

4、，吸附率可達(dá)（97.08±0.49）%，解吸率可達(dá)（96.71±0.63）%。純化后的金銀花葉黃酮純度為78.74%，比粗品黃酮純度提高了3.24倍。上述純化工藝可以使NKA-II樹脂去除金銀花葉中的大部分有機(jī)酸類物質(zhì)，更加有效地富集純化金銀花葉中的黃酮類化合物。
　?。?）將純化所得的金銀花葉黃酮進(jìn)行體外抗氧化活性研究。以Vc為對照品，對比了金銀花葉黃酮粗品及純品的總還原能力，以及清除DPPH自由基、羥自由基(·OH)、超氧陰離

5、子自由基(O2-·)的能力。實(shí)驗(yàn)表明：金銀花葉黃酮的抗氧化效果較好，純品的總還原力及對 DPPH、·OH、O2-·自由基的清除能力均比粗品強(qiáng)，并且在足夠濃度下接近甚至高于Vc對照品。
　?。?）探討金銀花葉黃酮對H2O2誘發(fā)RAW264.7巨噬細(xì)胞受損的緩解功能。體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，用H2O2誘導(dǎo)損傷該細(xì)胞，MTT法測定細(xì)胞存活率，并測定不同劑量金銀花葉黃酮處理組中細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫

6、酶（LDH）的活性及丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：金銀花葉黃酮可緩解H2O2誘發(fā)的RAW264.7細(xì)胞的受損程度，并呈劑量依賴性，它能夠降低H2O2處理后細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞中的MDA水平，升高SOD、GSH及LDH水平來緩解細(xì)胞受損程度。
　?。?）探討金銀花葉黃酮對D-半乳糖誘發(fā)衰老小鼠體內(nèi)血清和各器官衰老氧化受損的緩解程度。小鼠隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、Vc對照組、金銀花葉黃酮低、中、高劑量組。各

7、組小鼠（空白組除外）每天頸背部皮下注射 D-半乳糖構(gòu)建衰老小鼠模型，持續(xù)注射30 d。同時(shí)，對各組衰老小鼠分別以低、中、高劑量組黃酮和Vc溶液進(jìn)行灌胃。測定小鼠體質(zhì)量變化和各臟器指數(shù)，并測定血清及各器官組織中抗氧化酶等指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，與空白組對比，模型組小鼠體質(zhì)量和臟器指數(shù)均顯著下降，血清和器官中各抗氧化酶及GSH水平均有所降低，MDA水平升高，且大部分差異顯著（P＜0.05），說明衰老小鼠模型構(gòu)建成功。與模型組相比，金銀花葉黃酮各