GalNAc-T14多抗的制備、組織表達及與IGFBP-3共定位研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、N-乙酰氨基半乳糖轉移酶家族是粘蛋白O-糖基化的起始酶,負責將供體UDP-GalNAc上的GalNAc基團轉移至受體蛋白多肽鏈特定序列中的Ser 或Thr 羥基上,從而合成O-聚糖。近年來有人指出,O-糖基化可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切關系,因此對該酶家族的研究也受到越來越多重視。N-乙酰氨基半乳糖轉移酶-14(GalNAc-T14)是該家族中截止至目前最新發(fā)現(xiàn)的成員,由于其發(fā)現(xiàn)相對較晚,且對其研究尚未得以廣泛重視,因此對GalNAc-

2、T14在癌組織和癌細胞中的表達、生物學特征及功能之間的關系都需要深入研究。
   本論文對GalNAc-T14基因進行了以下三方面的研究:
   1.利用生物信息學方法分析GalNAc-T14蛋白序列,釣取了其Cdna 序列,將該序列亞克隆入Pet-DsbA與His-tag 融合表達;并且對誘導及純化條件進行了優(yōu)化。通過免疫新西蘭大耳白兔,獲得多抗血清。利用雙向免疫擴散檢測所制備的多抗效價,通過免疫印跡方法鑒定多抗特異性

3、,并檢測GalNAc-T14在不同組織的表達情況。結果表明:制備的GalNAc-T14 多克隆抗血清是高特異性的,GalNAc-T14蛋白在乳腺癌細胞和腎癌細胞中均有表達,并推測如果在腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)低表達GalNAc-T14 則可能顯示腫瘤惡性程度較高,與腫瘤易發(fā)生轉移,預后差密切相關。
   2.將GalNAc-T14和IGFBP-3 共轉染MCF-7細胞,利用confocAl顯微鏡觀察兩者的共定位情況。結果表明:GalNAc

4、-T14和IGFBP-3在細胞內(nèi)存在共定位現(xiàn)象。
   3.成功構建了GalNAc-T14 昆蟲細胞重組表達載體。將GalNAc-T14 Cdna 序列亞克隆入Pmt/BIP/V5-HIS C 載體,轉染果蠅S2細胞系,為將來利用昆蟲表達系統(tǒng)獲得GalNAc-T14蛋白,為深入研究GalNAc-T14的功能奠定基礎。
   總之,本論文對于GalNAc-T14 功能進行了初步的研究和探討,將GalNAc-T14與IGFB

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