血清IGF-I及IGFBP-3在非霍奇金氏淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、背景：
　　我國惡性淋巴瘤近年來新發(fā)病例逐年上升，發(fā)病率有明顯上升趨勢。其發(fā)病率與死亡率占所有惡性腫瘤的第11-13位，淋巴瘤已成為我國常見的惡性腫瘤之一。我國淋巴瘤以非霍奇金淋巴瘤(NHL)多見，NHL是目前增長速度最快的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康。近年NHL在分子診斷上有了長足的發(fā)展和認(rèn)識，但對淋巴瘤預(yù)后評估還沒有一套很完整的統(tǒng)一指標(biāo)。血清胰島素樣生長因子-I(IGF-I)及胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-

2、3)的表達(dá)與很多惡性腫瘤相關(guān)。腫瘤的發(fā)生是細(xì)胞增殖與凋亡失控的結(jié)果，也是細(xì)胞周期失控的結(jié)果，胰島素樣生長因子軸在調(diào)控細(xì)胞生長及凋亡過程中發(fā)揮極其重要的作用。目前在國內(nèi)外關(guān)于血清IGF-I及IGFBP-3與淋巴瘤關(guān)系的研究報(bào)道較少。另一方面，目前IGF-IR及其他受體型酪氨酸激酶多靶點(diǎn)抑制劑與化療藥合用治療腫瘤已成為熱點(diǎn)，以IGF-I及IGFBP-3調(diào)控或作用途徑為靶點(diǎn)的研究將有可能為非霍奇金氏淋巴瘤的防治提供新的策略及途徑。因此，我們測

3、定IGF-I及IGFBP-3的血清水平并分析其與非霍奇金氏淋巴瘤的診斷、治療效果及預(yù)后的關(guān)系。通過這些分析，有助于非霍奇金氏淋巴瘤的診斷、治療及預(yù)后，判定為將來的相關(guān)靶向治療臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　目的：
　　定量測定血清 IGF-I及 IGFBP-3在非霍奇金氏淋巴瘤中的表達(dá)狀況，分析IGF-I及 IGFBP-3與非霍奇金氏淋巴瘤的診斷、治療效果及預(yù)后的可能關(guān)系，有助于非霍奇金氏淋巴瘤的診斷、治療效果評估及預(yù)后評估，也為探

4、討以IGF-I及IGFBP-3調(diào)控或作用途徑為靶點(diǎn)的淋巴瘤防治新方案提供思路及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究對象和方法：
　　1.研究對象：
　?。?）實(shí)驗(yàn)組：選擇2009年5月至2012年1月在廣州市第一人民醫(yī)院和南方醫(yī)院確診為NHL的住院患者50例。
　?。?）正常對照組：選擇同期在廣州市第一人民醫(yī)院住院的非腫瘤患者和健康體檢者共50例。
　　2.血清分離
　　抽取研究對象空腹外周血3ml置干燥試管，2小時(shí)

5、內(nèi)3000 rpm離心10分鐘，吸取上層血清分裝,置冰箱-25℃保存?zhèn)溆谩?br>　　3.雙抗夾心法ELISA（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）檢測IGF-I、IGFBP-3水平：
　?。?）使用美國DPC公司的IMMULITE1000型自動發(fā)光免疫分析儀，分別采用IMMULITE1000 IGF-I和IMMULITE1000 IGFBP-3試劑盒測定 IGF-I和IGFBP-3。
　　（2）IMMULITE1000系統(tǒng)使用特異性抗體（

6、鼠抗人 IGF-I單抗或鼠抗人IGFBP-3單抗）包被珠做為固相，包被珠盛放在專利技術(shù)的測試杯中，加入定量的待測血清振動混勻后，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的第二抗體（多克隆的兔抗人 IGF-I抗體或單克隆鼠抗人 IGFBP-3抗體）分別孵浴60min或30min；
　?。?）經(jīng)過離心清洗，測試杯中的液相混合物同包被珠快速分離。全部的反應(yīng)液被甩至測試杯的同軸小室中，包被珠上沒有殘留的未結(jié)合物；
　　（4）然后，加入底物二氧四節(jié)環(huán)發(fā)生

7、定量發(fā)光，儀器通過光電倍增管檢測發(fā)光強(qiáng)度，并計(jì)算打印出樣本的檢測結(jié)果。
　?。?）樣品中的待測分子濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量分析。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　兩組以上的組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，并作樣本均數(shù)兩兩比較的q檢驗(yàn)（Student-Newman-keuls法）。兩組之間的組間比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)(ihdependent-samples t test)，并對樣本進(jìn)行

8、正態(tài)性檢驗(yàn)（One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test）。對等級分組資料采用雙側(cè)Spearman檢驗(yàn)，對連續(xù)計(jì)量資料采用雙側(cè)Pearson檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　一. NHL組和正常對照組的比較：
　　（1）血清IGF-I水平：NHL組為109.37±24.87ng/mL，對照組為182.86±26.86 ng/mL，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)為P<0.0001，t值為8.631，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。NHL組的

9、血清IGF-I水平顯著低于正常對照組(P<0.01)；
　　（2）血清IGFBP-3水平：NHL組為2.75±0.72 ug/ml，對照組為4.73±0.52 ug/ml，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)為P<0.0001，t值為9.002，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。NHL組的血清IGFBP-3水平顯著低于正常對照組(P<0.01)；
　?。?）IGF-I/IGFBP-3：NHL組為(40.35±4.66)×10-3，對照組為（38.72±4.15）×1

10、0-3，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)P=0.069，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。NHL組的IGF-I/IGFBP-3與正常對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.01)。
　　二. NHL患者按照不同分組的比較：
　?。?）血清IGF-I水平：
　?、偾忠u性淋巴瘤組為108.28±25.98ng/mL，惰性淋巴瘤組為109.17±24.78 ng/mL，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)為P＞0.01，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　?、冖衿谂cⅡ期、Ⅲ期之間未見顯著性差異（p>0.

11、01），但均高于Ⅳ期（p<0.01）；
　?、鄣臀＝M與低中危組、中高危組之間未見顯著性差異（p>0.01），但均高于高危組（p<0.01）。
　?。?）血清IGFBP-3水平：
　?、偾忠u性淋巴瘤組為2.72±0.74 ug/ml，惰性淋巴瘤組為2.79±0.78 ug/ml，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)為P＞0.01，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　?、冖衿谂cⅡ期、Ⅲ期之間未見顯著性差異（p>0.01），但均高于Ⅳ期（p<0.01）；

12、r>　?、鄣臀＝M與低中危組、中高危組之間未見顯著性差異（p>0.01），但均高于高危組（p<0.01）。
　?。?）IGF-I/IGFBP-3比值：
　　①侵襲性淋巴瘤組為（40.40±5.59）×10-3，惰性淋巴瘤組為（40.56±4.86）×10-3，獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)P=0.282，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　　②Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期之間未見顯著性差異（p>0.01）；
　?、鄣臀＝M與低中危組、中高危組、高危組之間未

13、見顯著性差異（p>0.01）。
　　三. NHL患者化療前后IGF-I、IGFBP-3及IGF-I/IGFBP-3比值的變化及比較：
　?、倩熐癐GF-I:108.28±25.98 ng/ml，化療后IGF-I:168.97±29.98 ng/ml，兩者配對樣本T檢驗(yàn) P<0.0001,有顯著差異。
　?、诨熐癐GFBP-3:2.72±0.74 ug/ml，化療后IGFBP-3:4.18±0.61 ug/ml，兩者

14、配對樣本T檢驗(yàn) P<0.0001,有顯著差異。
　　③化療前IGF-1/IGFBP-3比值:（40.40±5.59）×10-3，化療后IGF-1/IGFBP-3比值:（40.52±4.67）×10-3，兩者配對樣本T檢驗(yàn) P=0.856,兩者之間無差異。
　　結(jié)論：
　　1.NHL組血清IGF-I及IGFBP-3水平均顯著低于正常對照組(P<0.01)，可能與NHL的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，有助于NHL的診斷。
　　2.N

15、HL組 IGF-I/IGFBP-3與正常對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.01)，IGF-I／IGFBP-3比值與NHL無明顯相關(guān)性。
　　3.侵襲性淋巴瘤組和惰性淋巴瘤組血清IGF-I、IGFBP-3及IGF-1/IGFBP-3比值無顯著差異。
　　4.Ⅳ期NHL患者及高危組NHL患者血清IGF-I及IGFBP-3水平較其他組均顯著降低，血清IGF-I及IGFBP-3水平在一定程度反映NHL的發(fā)展情況及預(yù)后評估。