PPARγ2內(nèi)源性配體對成骨細胞及骨髓細胞骨代謝相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、骨組織代謝活躍，通過破骨細胞吸收舊骨和成骨細胞形成新骨這兩個既相互偶聯(lián)又相互制約的骨轉(zhuǎn)換過程，不斷進行骨重建以對自身進行新陳代謝。增齡時破骨細胞和成骨細胞發(fā)生數(shù)量與功能的改變，從而打破骨平衡狀態(tài)，導(dǎo)致增齡相關(guān)的骨量減少及骨質(zhì)疏松癥?，F(xiàn)已明確成骨細胞、破骨細胞及脂肪細胞均來源于骨髓細胞，隨增齡骨髓細胞成骨分化可塑性下降，向脂肪細胞分化潛能增加，此過程與調(diào)節(jié)脂肪分化的PPARγ2基因表達增加有關(guān)，提示此基因可能直接參與了骨代謝過程。高表達P

2、PARγ2的原因推測與增齡使其內(nèi)源配體產(chǎn)生增加和其它轉(zhuǎn)錄因子對其抑制作用減弱有關(guān)。隨增齡機體內(nèi)許多PPARγ2天然配體水平增高，如多不飽和脂肪酸、氧化低密度脂蛋白等，它們是否參與了增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生，目前相關(guān)報道較少。本實驗擬觀察不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、亞油酸、LTB4干預(yù)后，成骨細胞及骨髓細胞PPARγ2及骨代謝相關(guān)基因RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表達水平的變化，為進一步探討增齡相關(guān)

3、的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生機制提供新思路。
　　 一、PPARγ2內(nèi)源性配體對成骨細胞骨代謝相關(guān)基因表達的影響
　　 目的：觀察不同濃度PPARγ2內(nèi)源性配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共軛亞油酸(c9,t11-CLA和 t10,c12-CLA)干預(yù)后，大鼠成骨細胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG mRNA表達水平的變化，探討以上四種PPARγ2內(nèi)源性配體對骨代謝的影響。
　　 方法：在體外培養(yǎng)的

4、大鼠成骨細胞中分別加入不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干預(yù)24小時，采用半定量RT-PCR檢測成骨細胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表達水平，分別比較上述四種PPARγ2內(nèi)源性活化配體對骨代謝相關(guān)基因表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 （1）不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈劑量依賴性下調(diào)成骨細胞RANKL、ALP、OPG

5、mRNA的表達水平，同時呈劑量依賴性上調(diào)PPARγ2 mRNA的表達水平，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；
　　 （2）不同濃度c9,t11-CLA呈劑量依賴性上調(diào)成骨細胞RANKL和OPG mRNA的表達水平，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，且呈非劑量依賴性上調(diào) ALP mRNA的表達，但干預(yù)組PPARγ2 mRNA的表達水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。不同濃

6、度t10,c12-CLA呈劑量依賴性上調(diào)成骨細胞RANKL和OPG mRNA的表達水平，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；且呈非劑量依賴性上調(diào) ALP mRNA的表達，同時下調(diào)PPARγ2 mRNA的表達，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性抑制成骨細胞成骨標記物基因的表達

7、，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病過程，而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通過促進成骨基因表達有利于骨形成，在骨代謝中發(fā)揮正調(diào)控作用。
　　 二、PPARγ2內(nèi)源性配體對大鼠骨髓細胞骨代謝相關(guān)基因表達的影響
　　 目的：因骨髓細胞中含有成骨細胞及破骨細胞的前體細胞，故觀察不同濃度PPARγ2內(nèi)源性配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共軛亞油酸(c9,t11-CLA和 t10,c12-CLA)

8、干預(yù)后，大鼠骨髓細胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表達水平的變化，探討以上四種PPARγ2內(nèi)源性活化配體在骨代謝中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠骨髓細胞，分別加入不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干預(yù)24小時，采用半定量RT-PCR檢測骨髓細胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK及TRAP mRNA表達水平，分別

9、比較上述四種PPARγ2內(nèi)源性配體對骨代謝相關(guān)基因mRNA表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 （1）不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈劑量依賴性下調(diào)骨髓細胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表達水平，同時呈劑量依賴性上調(diào)PPARγ2、 RANK、TRAP mRNA的表達水平，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；
　　 （2）不同濃度c9,t11-CLA呈劑量依賴性下調(diào)骨髓細

10、胞RANK、TRAP mRNA的表達水平，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，但干預(yù)組RANKL、ALP、OPG及PPARγ2 mRNA表達水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。不同濃度t10,c12-CLA呈劑量依賴性上調(diào)骨髓細胞RANKL、OPG mRNA的表達水平，同時呈劑量依賴性下調(diào)RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表達，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，但干預(yù)組

11、ALP mRNA的表達與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性抑制骨髓細胞成骨標記物基因的表達，促進破骨細胞標記物基因的表達，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松的發(fā)病過程，而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通過促進骨髓細胞成骨基因表達或抑制破骨細胞基因表達而促進骨形成，在骨代謝中發(fā)揮正調(diào)控作用。

12、　　 結(jié)論：
　　 1PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性下調(diào)成骨細胞RANKL、OPG、ALP mRNA表達，上調(diào) PPARγ2表達，抑制成骨過程；同時內(nèi)源性配體激活PPARγ2可下調(diào)骨髓細胞RANKL、OPG、ALP mRNA的表達，上調(diào)其RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表達，通過抑制成骨細胞分化，促進破骨細胞分化，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松的發(fā)病過