WalK突變導(dǎo)致金黃色葡萄球菌萬(wàn)古霉素敏感性減弱的機(jī)制研究.pdf

1、細(xì)胞壁靶向抗生素一般都具有殺菌作用，這與蛋白質(zhì)合成抑制因子抑菌效果不同。因此，細(xì)菌殺傷作用常常伴隨著肽聚糖生物合成的抑制及細(xì)胞裂解。然而，細(xì)菌并沒(méi)因此保持著對(duì)細(xì)胞壁靶向抗生素的敏感性，伴隨著細(xì)菌適應(yīng)性進(jìn)化，耐藥性發(fā)生已成為普遍現(xiàn)象。1950年末，由于產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶而對(duì)青霉素耐受的金黃色葡萄球菌已廣泛出現(xiàn)。1960年初，臨床開(kāi)始引入β-內(nèi)酰胺酶耐受的苯唑西林，二十年后，苯唑西林耐受金黃色葡萄球菌成為醫(yī)院獲得性感染中常見(jiàn)病原菌，并且MRS

2、A對(duì)許多不同類型抗生素都具有耐受性。1997年，萬(wàn)古霉素中度耐受金黃色葡萄球菌被首次發(fā)現(xiàn)，隨后在美國(guó)又發(fā)現(xiàn)了萬(wàn)古霉素完全耐受金黃色葡萄球菌。這些耐藥菌的發(fā)現(xiàn)暗示著廣譜耐藥性金黃色葡萄球菌存在的可能性。本文主要對(duì)萬(wàn)古霉素中度耐受的分子機(jī)制進(jìn)行探究，希望能為新型藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)提供理論基礎(chǔ)。
　　點(diǎn)突變常常會(huì)導(dǎo)致臨床菌株的抗生素耐受，然而耐藥性發(fā)生的分子機(jī)制目前仍不清楚。我們利用抗生素篩選獲得了萬(wàn)古霉素中度耐受金黃色葡萄球菌，并通過(guò)全基

3、因組測(cè)序鑒定該菌株的遺傳變化，發(fā)現(xiàn)二元信號(hào)組分WalK(G223D)發(fā)生了點(diǎn)突變。我們用walK(G223D)替換野生型MW2中正常walK，發(fā)現(xiàn)單點(diǎn)突變的菌株細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)、自溶活性減弱、細(xì)胞壁增厚以及萬(wàn)古霉素敏感性減弱。磷酸化分析實(shí)驗(yàn)表明WalK(G223D)自磷酸化能力減弱，進(jìn)而導(dǎo)致WalR磷酸化水平降低。另外，凝膠遷移實(shí)驗(yàn)顯示被WalK(G223D)磷酸化的WalR結(jié)合atlA啟動(dòng)子能力減弱。綜上所述，walK點(diǎn)突變