HPV感染情況分析及HVJ-E誘導Hela細胞凋亡機制的研究.pdf

1、人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)在人群中廣泛傳播，感染人體皮膚和粘膜引起良性或惡性病變。研究發(fā)現尋常疣、尖銳濕疣、宮頸癌、皮膚癌、陰道癌、陰莖癌、肛門癌、乳腺癌等均與HPV感染相關，其中95％的宮頸癌由高危型人乳頭瘤病毒感染引起。HPV感染分布存在年齡與地區(qū)差異性，不同年齡段、不同地區(qū)HPV的感染率和亞型分布不同。我們通過分析揚州地區(qū)10473例婦女HPV感染情況，對本地區(qū)婦女HPV感染情況進行初步了解

2、，為當地HPV感染性疾病的防治提供依據，同時探討日本血凝病毒囊膜（Hemagglutinating virus of Japan envelope，HVJ-E）誘導HPV18陽性的Hela細胞凋亡的作用機制，為腫瘤治療提供新的手段。
　　一、HPV感染情況分析
　　目的:
　　了解揚州地區(qū)婦女人群中人乳頭瘤病毒感染情況，為當地HPV感染性疾病的防治提供依據。
　　方法:
　　收集2015年10月--2016

3、年10月在蘇北人民醫(yī)院皮膚科和婦科門診就診的18-86歲10473例女性患者宮頸脫落上皮細胞，采用PCR-反向點雜交法檢測HPV21種基因亞型。按患者年齡劃分為≤29歲，30-39歲，40-49歲，50-59歲，≥60歲五個年齡組，分析HPV各亞型分布特點，卡方檢驗比較各年齡組感染率。
　　結果:
　　10473例女性患者，感染HPV2577例，感染率為24.61％，單一感染1819例，多重感染758例，感染率分別為17.3

4、7％，7.24％;≤29歲，30-39歲，40-49歲，50-59歲，≥60歲五個年齡組HPV感染率和HPV感染陽性百分比分別為23.88％，23.36％，23.77％，28.25％，32.27％和17.66％，27.40％，34.65％，14.82％，5.47％; Hr-HPV感染檢出率為28.40％，其中Hr-HPV-16，52，58，53，39，51檢出數位居前六，檢出率依次為4.54％，4.33％，3.64％，2.96％，2.1

5、7％，1.96％，Hr-HPV-18檢出率較低，僅為1.46％; Lr-HPV感染檢出率為5.99％，其中Lr-HPV-81，11，6，44檢出數位居前四，檢出率依次為3.16％，0.93％,0.91％,0.72％。
　　結論:
　　揚州地區(qū)HPV感染分布具有年齡差異性及區(qū)域性;感染的高峰人群集中在30-49歲，常見高危及低危亞型分別為Hr-HPV-16，52，58，53，39，51和Lr-HPV-81，11，6，44。在揚

6、州地區(qū)開展HPV21種基因亞型檢測對揚州地區(qū)HPV感染性疾病的防治具有指導意義。
　　二、HVJ-E誘導Hela細胞凋亡機制的研究
　　目的:
　　選取HPV18陽性的Hela細胞為研究對象，探討HVJ-E誘導Hela細胞凋亡的作用機制。
　　方法:
　　取不同濃度的HVJ-E病毒粒子接種Hela細胞，倒置顯微鏡觀察Hela細胞形態(tài)變化，CCK-8法檢測細胞活力，FACS法檢測細胞凋亡率，western b

7、lot法檢測p53、Bcl-2/Bax、Caspase信號通路、MAPK信號通路蛋白表達情況。為進一步證實Caspase信號通路、MAPK信號通路在HVJ-E誘導Hela細胞凋亡中的作用，用Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK(50μM)，ERK1/2抑制劑U0126(18μM)，JNK抑制劑SP600125(5μM)，p38抑制劑SB203580(12.5μM)分別預處理Hela細胞20min，2h，40min，2h，加入HVJ

8、-E(800 MOI)病毒粒子，CCK-8法檢測各組細胞活力，FACS法檢測各組細胞凋亡率，western blot法檢測Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表達情況。
　　結果:
　　HVJ-E作用于Hela細胞，引起細胞生長停滯、皺縮及破裂;隨著HVJ-E病毒粒子濃度增加，Hela細胞活力逐漸降低，凋亡率逐漸增加，p53、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表達逐漸增

9、強，Bcl-2抗凋亡蛋白表達逐漸減弱，Bax促凋亡蛋白無明顯變化，Bcl-2與Bax比值隨病毒濃度增加而降低;在MAPK通路中，ERK1/2、JNK和p38磷酸化蛋白的表達量與病毒濃度呈劑量效應關系。抑制劑處理Hela細胞后可下調HVJ-E誘導的細胞凋亡，減少HVJ-E導致的細胞死亡，同時抑制Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表達。
　　結論:
　　HVJ-E能抑制Hela細胞增殖，誘