殼聚糖對神經(jīng)毒物二氯二丁基錫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　　二氯動物模型二丁基錫(DBT)作為化工原料被廣泛應(yīng)用于殺蟲劑和塑料穩(wěn)定劑，是一種神經(jīng)高毒性化合物。殼聚糖(CS)是天然無毒的多聚糖，具有抗菌、抗真菌、抗癌、抗糖尿病、抗炎、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)等多種生物活性。本論文旨在通過體外實驗研究CS對 DBT誘導(dǎo)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用以及其潛在的作用機制。
　　方法：
　　本文首先采用MTT法、乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗及形態(tài)學(xué)觀察研究CS對

2、DBT損傷后PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。經(jīng)AO/EB熒光染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞的凋亡，流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平及線粒體膜電位(MMP)。采用實時熒光定量PCR技術(shù)測定凋亡相關(guān)蛋白mRNA的表達(dá)量，并通過western blotting進(jìn)一步檢測Bcl-2、Bax、caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　CS預(yù)處理可以濃度依賴性增加

3、DBT所引起的 PC12細(xì)胞活力下降，減少 DBT誘導(dǎo)LDH的釋放和形態(tài)學(xué)的改變。與DBT處理組相比，CS能夠明顯減少細(xì)胞的凋亡和胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，部分恢復(fù)MMP。實時熒光定量PCR實驗表明，DBT導(dǎo)致Bcl-2和Bcl-xL的mRNA表達(dá)水平降低，同時增加Bad、Bax、cytochome-c、Apaf-1、caspase-9和caspase-3的mRNA水平，而采用CS預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)上述基因表達(dá)的改變。在蛋白水平上，CS可以明顯上調(diào)