海綿共附生放線菌篩選與抑制海水養(yǎng)殖病原弧菌研究.pdf

1、本文以研究海綿共附生放線菌次級代謝產(chǎn)物對海水養(yǎng)殖病原弧菌的抑菌活性為主要目的，從腎指海綿（Reniochalina sp.），山海綿（Mycale sp.）和居蟹皮海綿（Suberites domuncula）中分離培養(yǎng)出27株共附生放線菌，與實(shí)驗(yàn)室前期保存的海綿放線菌去重后共59株，16S rDNA序列比對初步鑒定均為鏈霉菌屬（Streptomyces）放線菌。以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈維弧菌（

2、Vibrio harveyi）、鰻弧菌（Vibrio anguillarum）、燦爛弧菌（Vibro Splendidus）4株革蘭氏陰性菌和海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）、馬胃葡萄球菌（Staphylococcus equorum）2株革蘭氏陽性菌為指示菌，對59株放線菌的抑菌活性進(jìn)行反復(fù)篩選，篩選出11株抑菌活性較強(qiáng)且具有廣譜性的放線菌，并確定海綿放線菌FH作為研究的目標(biāo)菌株。
　　以副溶血弧菌、哈維弧菌

3、為指示菌，對FH菌株的抑菌活性研究如下：
　　對海綿放線菌 FH的16S rDNA序列進(jìn)行測序分析，初步鑒定為球孢鏈霉菌（Streptomyces globisporus）。以抑菌活性為導(dǎo)向?qū)H菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果為溫度25℃，pH值7.5，裝液量30mL/250mL，發(fā)酵時間120h。FH菌株特征研究顯示，F(xiàn)H發(fā)酵液粗提物相當(dāng)于慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)液的效價為387.27mg/L，在4℃和-20℃低溫條件下保存2個月對各指

4、示菌的抑菌活性穩(wěn)定。
　　在滅菌海水中，添加FH菌株發(fā)酵產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)組，初始密度103個/mL的副溶血弧菌和哈維弧菌均得到了有效抑制甚至殺死；添加FH菌絲體的實(shí)驗(yàn)組中，初始密度103個/mL的副溶血弧菌和初始密度102個/mL的哈維弧菌得到了有效抑制。在海參育苗中，F(xiàn)H菌絲體在弧菌病害預(yù)防中則表現(xiàn)出較好的結(jié)果，作為生物防治具有可行性。而FH發(fā)酵產(chǎn)物和發(fā)酵液粗提物不適合直接添加到養(yǎng)殖海水中作為預(yù)防或治療的手段。
　　上述海綿放線