MiR155在心臟移植物排斥反應的作用及機制研究.pdf

1、第一部分心臟移植模型的建立和移植物局部淋巴細胞miR-155表達分析
　　目的：建立穩(wěn)定有效的小鼠腹部心臟移植模型。明確miR-155在移植物局部淋巴細胞的表達變化。
　　方法：1：以 C57BL/6小鼠為受體，Balb/c小鼠心臟作為供體，建立小鼠心臟移植急性反應模型；以C57BL/6小鼠為受體，Bm12小鼠心臟作為供體，建立小鼠心臟移植慢性排斥反應模型；觀察兩組移植物心臟的生存時間。2：在心臟急性排斥反應移植后7天/慢性

2、排斥反應后60天，觀察移植物心臟排斥反應病理變化。3：分離移植物心臟局部淋巴細胞，qPCR檢測miR-155表達水平。
　　結(jié)果：1：在心臟移植急性/慢性排斥反應模型中，同種異型移植組供心平均存活時間為（7.5±0.37）/（63.4±4.37）天;2：與同系移植組相比，兩種同種異型移植組移植物心肌組織內(nèi)均有不同程度炎癥細胞浸潤，伴明顯心肌細胞變性壞死，心肌間質(zhì)纖維化。3：移植物中局部淋巴細胞的miR155明顯升高。
　　結(jié)

3、論：本實驗模型能較好的反應急性/慢性排斥反應的病理變化，達到模型建立標準，可以用于本課題移植免疫的研究。移植物局部淋巴細胞的miR-155表達明顯升高，可能對移植物排斥反應有調(diào)節(jié)作用。
　　第二部分 miR-155在心臟急性排斥反應中的作用及機制研究
　　目的：探討miR-155在心臟移植急性排斥反應中的作用和機制。
　　方法:1：建立心臟移植急性排斥反應模型，測定心臟移植物存活時間和組織局部的細胞因子表達變化，并對移

4、植物局部組織進行病理染色。流式分析脾臟細胞的T細胞亞群變化。2：對建模成功的miR-155-/-小鼠進行rIL-17A干預，并進行病理分析及局部細胞因子分析。3：分離miR155-/-和/或 miR155+/+CD4+脾細胞，過繼輸入 Rag1-/-小鼠體內(nèi)，然后行心臟移植手術(shù)，觀察不同小組移植物排斥反應程度，以及Th17比例變化。
　　結(jié)果:miR-155-/-組移植物存活時間延長，心肌細胞炎癥細胞細胞浸潤明顯減輕，伴隨著細胞因

5、子IL-17A明顯減少。重組細胞因子IL-17A能夠逆轉(zhuǎn)這種保護作用。細胞過繼進一步證實miR155-/-小鼠的保護作用是通過Th17細胞免疫反應來實現(xiàn)的，并證實miR155敲除后的Th17細胞表型穩(wěn)定性明顯減弱。
　　結(jié)論：敲除miR155可能通過減弱Th17免疫效應來緩解心臟移植物急性排斥反應
　　第三部分 miR-155在心臟慢性排斥反應中的作用及機制研究
　　目的：探討miR-155在心臟移植急性排斥反應中的作

6、用和機制。
　　方法:1：建立心臟移植急性排斥反應模型，測定心臟移植物存活時間和組織局部的細胞因子表達變化，并對移植物局部組織進行病理染色。流式分析脾臟細胞的T細胞亞群變化。2：對建模成功的miR-155-/-小鼠進行rIL-17A干預，并進行病理分析及局部細胞因子分析。3：體外應用miR-155+/+或者 miR-155-/-CD4+T細胞，進行Th1/Th17/Treg誘導，流式檢測IFN-γ、IL-17A和Foxp3表達。并

7、對miR-155相關(guān)靶基因進行檢測。
　　結(jié)果:miR-155-/-組移植物存活時間延長，移植物血管病變及炎癥細胞浸潤明顯減輕，伴隨著細胞因子IFN-γ/IL-17A明顯減少。重組細胞因子IL-17A能夠逆轉(zhuǎn)這種保護作用。體外Th17細胞誘導實驗證實，miR-155缺失可以明顯減弱IL-17A表達。這種作用可能通過c-Maf或SOCS1來實現(xiàn)的。
　　結(jié)論：敲除miR155也可以通過調(diào)節(jié)Th1/Th17免疫反應來緩解慢性移植