糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與β淀粉樣肽的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 利用2型糖尿病患者(type2diabetesmellitus，T2DM)血清干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVECs)，觀察干預(yù)后上清液中丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)、過氧化物歧化酶(superoxideDismutase，SOD)和一氧化氮(nitricoxide，NO)的水平及β淀粉樣肽(amyloid-β，Aβ)40、Aβ

2、42水平的差異，探討T2DM患者血清對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及其與Aβ40和Aβ42的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1.選取T2DM患者和健康對照者各10例，收集相關(guān)資料;培養(yǎng)HUVEC，分別暴露于10％糖尿病患者血清(diadeticserum，DS)、10％健康人血清(healthserum，HS)及10％胎牛血清(fetalbovineserum，F(xiàn)BS)中。
　　 2.倒置顯微鏡觀察干預(yù)30min、3h以及3d時

3、的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;四甲基偶氮唑藍(lán)法(multiply-tabletournament，MTT)觀察干預(yù)3d時各組血清對細(xì)胞生存率的影響
　　 3.干預(yù)30min、3h、3d后分別取各組細(xì)胞上清液，黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，評定細(xì)胞抗氧化能力;硫代巴比妥酸法測定MDA含量，評定脂質(zhì)過氧化情況;ELISA法測定NO濃度，了解內(nèi)皮功能;ELISA法檢測Aβ40和Aβ42的含量，探討DS血清對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷與Aβ40和Aβ42的相關(guān)

4、性。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
　　 在30min及3h時各組細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化，3d時FBS組和HS組可見細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)清楚，大小均勻，呈單層鵝卵石形狀緊密排列，DS組可見細(xì)胞變圓、皺縮、胞體碎裂，細(xì)胞數(shù)量減少、排列紊亂。
　　 2.各組生存率的變化
　　 各組細(xì)胞生存率與FBS組比較，均無顯著性差異(P＞0.05)，與HS組（133.33±37.53）比較，DS組（77.46±

5、21.32）細(xì)胞生存率顯著降低(P=0.000)。
　　 3.HUVECs培養(yǎng)上清液中SOD、MDA以及NO的變化
　　 3.1DS組HUVECs上清中SOD活力降低在同一時間段，分別在干預(yù)30min、3h、3d，F(xiàn)BS組與HS組比較SOD的活力無顯著性差異(P＞0.05);在干預(yù)3h時，DS（25.63±4.50）與FBS（30.67±2.06）和HS（31.08±4.90）比較，能明顯增加SOD活力（P值分別為0.0

6、06，0.003）;在干預(yù)3d時，DS(20.67±4.24)與FBS（31.39±1.29）和HS（33.8±5.47）比較，能顯著增加SOD活力(P值分別為0.000，0.000)。
　　 不同時間段間進行比較，在DS內(nèi)，30min與3hSOD活力無明顯差別(P＞0.05)，3d（20.67±4.24）時較30min（28.49±3.99）和3h(25.63±4.50)明顯降低(P值分別為0.000，0.005);在HS內(nèi)，

7、各個時間段間均無顯著性差異(P＞0.05);在FBS內(nèi)，30min與3h無明顯差別(P＞0.05)，3d(31.39±1.29)較30min(28.86±2.12)和3h(30.67±2.06)SOD的活力明顯增加(P=0.005，0.039)。
　　 3.2DS組HUVECs上清中MDA水平升高在同一時間段，分別在干預(yù)30min、3h、3d時，F(xiàn)BS與HS比較MDA的生成無顯著性差異(P＞0.05);在干預(yù)3h，DS（2.35

8、±0.67）分別與FBS(3.02±0.19)和HS（2.38±0.62）比較，MDA的含量增加(P值分別為0.003，0.001)。在干預(yù)3d，DS（5.30±1.00）分別與FBS(3.13±0.39)和HS(3.25±0.80)比較，能顯著增加MDA的含量(P值分別為0.000，0.000)。
　　 在不同時間段間進行比較，30min與3h比較時各組內(nèi)MDA含量均無明顯差別(P＞0.05)。在DS組內(nèi)，在3d(5.30±1

9、.00)時較30min(3.98±0.81)和3h(2.35±0.67)MDA含量明顯增加(P=0.000，0.001);在HS組內(nèi)，在3d時(3.25±0.80)較30min(2.97±0.66)和3h(2.38±0.62)MDA含量明顯增加(P=0.005，0.041);在FBS組內(nèi)，3d時(3.13±0.39)較30min(2.34±0.58)和3h(3.02±0.19)時MDA的含量明顯增加(P=0.001，0.004)。

10、>　　 3.3DS組HUVECs上清中NO的產(chǎn)生減少30min和3h時各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);3d時，與HS組（430.80±67.93）比較，DS(349.44±63.63)能顯著減少NO的含量(P=0.003)。在FBS及HS組內(nèi)隨著時間的延長，NO有逐漸升高的趨勢，而DS組內(nèi)隨著時間的延長，NO有逐漸降低的趨勢。
　　 4.DS對HUVECs培養(yǎng)上清中Aβ40和Aβ42的影響
　　 4.1DS組HU

11、VECs上清中Aβ40的濃度增加在同一時間段，分別在干預(yù)30min、3h、3d，F(xiàn)BS與HS比較Aβ40的濃度均無顯著性差異(P＞0.05);在30min、3h及3d時，DS(178.37±58.73,207.12±68.65,286.11±74.83)與HS(161.10±71.83,38.25±56.56，108.25±56.93)比較均能顯著升高Aβ40的濃度(P=0.012，0.018，0.001);在3d時DS與FBS（150

12、.27±6.65）比較，能增加Aβ40的濃度(P=0.008)。0.001);在3d時DS與FBS（150.27±6.65）比較，能增加Aβ40的濃度(P=0.008)。
　　 在DS組內(nèi)，各個時間段進行比較，3d較30min及3hAβ40的濃度顯著升高(P=0.001，0.015);在HS和FBS組內(nèi)，各時間段Aβ40的濃度無明顯差別(P＞0.05)。
　　 4.2DS組HUVECs上清中Aβ42的濃度增加30min和

13、3h時各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);3d時分別與FBS(33.79±10.69)和HS(48.62±15.62)比較，DS（79.42±43.99）增加Aβ42的濃度(P=0.001，P=0.017)。DS、HS、FBS組內(nèi)各個時間段間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.DS以時間依賴的形式損傷HUVECs，表現(xiàn)為細(xì)胞生存率的降低、SOD活力的降低、MDA生成的增加以及NO合成減少，且均具

14、有一定的時間依賴性，以3d時的改變最為明顯，提示這種損傷是一個慢性的過程，而且內(nèi)皮細(xì)胞損傷機制與氧化應(yīng)激有關(guān)。
　　 2.內(nèi)皮細(xì)胞能表達(dá)一定量的Aβ40和Aβ42。DS培養(yǎng)的HUVECs上清液中MDA顯著升高，而SOD活力顯著下降，均具有一定的時間依賴性，并且與Aβ的水平基本平行，提示DS可以通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)HUVECs損傷的同時伴有Aβ水平的升高，Aβ既可能作為一種損傷因素參與了DS誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷，也可能是DS中高糖或其他毒性