Bad和PCNA在尖銳濕疣組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的：
　　尖銳濕疣(condyloma acuminatum，CA)是人類乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV)感染皮膚粘膜引起的良性贅生物，好發(fā)于外生殖器、肛周、尿道口、宮頸，偶可見(jiàn)于趾間、口腔、臍窩等部位。近年來(lái)CA的發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)，是目前我國(guó)很常見(jiàn)的性傳播性疾病(sexually transmitte diseases，STD）之一，該病主要發(fā)生在性活躍的人群中，多見(jiàn)于青壯年男女。雖然C

2、A是一種良性的增生性疾病，但其具有傳染性強(qiáng)，疣體增長(zhǎng)迅速，治療后常易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，且部分巨大型CA有癌變傾向，致使患者心理壓力大，甚至部分患者出現(xiàn)抑郁癥狀，嚴(yán)重影響患者的身心健康，該病成為國(guó)家疾病控制中心(centers for disease control，CDC)重點(diǎn)檢測(cè)的STD之一。
　　CA皮損生長(zhǎng)快，治療后高復(fù)發(fā)率，這可能與CA組織中存在異常增殖和凋亡的角質(zhì)形成細(xì)胞有關(guān)，但關(guān)于CA組織中角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖和異常凋亡的確

3、切機(jī)制尚不十分清楚，這種異常增殖和凋亡可能受到多種凋亡相關(guān)基因的調(diào)控。促凋亡蛋白Bad是Bcl-2家族蛋白中的一員，同時(shí)具有BH3同源結(jié)構(gòu)區(qū)域和序列，可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。當(dāng)?shù)蛲龃碳ば盘?hào)存在，可導(dǎo)致Bad的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，其活化后即轉(zhuǎn)位到線粒體外膜與Bcl-xL結(jié)合，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。多項(xiàng)研究表明，促凋亡蛋白Bad對(duì)多種腫瘤的形成、轉(zhuǎn)移有著重要的意義。PCNA是一種酸性的核蛋白，作為DNA聚合酶的一種輔酶，可以參加細(xì)胞異常增殖過(guò)程中DNA的復(fù)

4、制，而且還與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)密切相關(guān)，PCNA是目前公認(rèn)的腫瘤細(xì)胞S期的一種標(biāo)志物，已被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞異常增生的實(shí)驗(yàn)研究。但促凋亡蛋白Bad在CA組織中的表達(dá)情況以及其和PCNA的相關(guān)性缺乏研究，為探究CA組織中Bad的表達(dá)情況及其與PCNA之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化的方法檢測(cè)Bad和PCNA在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá)情況，探討B(tài)ad和PCNA在CA的發(fā)生、發(fā)展中的可能病理機(jī)制。
　　材料與方法：
　　1.材料

5、>　　53例CA患者皮損組織標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組，其中男性32例，女性21例；年齡16～65歲，平均32.5士8.7歲；病程14天～180天，平均50.7士4.3天。實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本均來(lái)自2015年9月至2016年9月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚與性病科門診患者。所有入選患者臨床表現(xiàn)典型，醋酸白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，皮損行組織病理檢查并符合CA的組織學(xué)表現(xiàn)，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證明有HPV感染存在，均與CA的診斷標(biāo)準(zhǔn)相符合，無(wú)其他系統(tǒng)性疾病，皮損取材前患者均未接受免疫性的

6、藥物、冷凍、激光等任何相關(guān)治療。28例正常對(duì)照組標(biāo)本都來(lái)自我院泌尿科成年男性包皮環(huán)切術(shù)后所切除的包皮組織，并經(jīng)組織病理檢查證明其為正常的組織上皮。
　　2.方法
　　采用免疫組化的方法檢測(cè)Bad和PCNA的表達(dá)情況，所有的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照所用試劑盒上的說(shuō)明進(jìn)行操作。Bad陽(yáng)性表達(dá)主要處于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性細(xì)胞顯色為棕黃色至棕褐色顆粒。PCNA陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色。參照文獻(xiàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)組織切片

7、中細(xì)胞染色強(qiáng)弱及陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞的百分比實(shí)行分級(jí)評(píng)分。染色強(qiáng)度分為不著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色，分別對(duì)應(yīng)著0分、1分、2分、3分。陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞的百分比：小于等于10％為0分，在11％和25％之間為1分，在26％和50％之間為2分，在51％和75％之間為3分，大于等于76％為4分。最后將上述兩項(xiàng)分值的乘積作為最終得分：得分為0分，判定陰性（-）；分值在1分和4分之間，判定為弱陽(yáng)性（+）；5分至8分，判定為陽(yáng)性（++）；9分至12分

8、，判定為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　將實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用χ2檢驗(yàn)Bad和PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率差異，Bad和PCNA的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度應(yīng)用秩和檢驗(yàn)的方法，運(yùn)用非參系統(tǒng)中的Spearman方法分析CA組織中Bad和PCNA之間的相關(guān)性，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.Bad在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá)
　　53例CA患者組織

9、中，Bad出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)為37例，其陽(yáng)性表達(dá)率為69.81%（37/53），陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度多呈++～+++，陽(yáng)性顯色主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)；28例正常包皮組織細(xì)胞中 Bad出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)為8例，其陽(yáng)性表達(dá)率為28.57%(8/28)，陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度多呈-～+。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中Bad的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.436，P<0.05），Bad在兩組中的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（H=23.063，P<0.05）。
　　2

10、.PCNA在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá)
　　53例CA患者組織中，PCNA出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)為46例，其陽(yáng)性率為86.79%（46/53），陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度多呈++～+++，陽(yáng)性顏色主要位于細(xì)胞核，大多數(shù)呈棕褐色顆粒；28例對(duì)照組中PCNA出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)為11例，其陽(yáng)性表達(dá)率為39.28%，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度大多數(shù)呈+～++。兩組中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.356，P<0.05），PCNA在兩組中的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度有明顯的統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)差異（H=13.452，P<0.05）。
　　3.Bad和PCNA在CA組織中表達(dá)的相關(guān)性分析
　　在37例Bad表達(dá)陽(yáng)性中，PCNA陽(yáng)性表達(dá)的有31例，6例陰性；在46例PCNA蛋白表達(dá)陽(yáng)性中，Bad出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)的有31例，陰性15例。經(jīng)過(guò)Spearman相關(guān)分析CA組織中Bad與PCNA的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.379，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．Bad在CA組織中的陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均

12、高于對(duì)照組，表明CA組織中存在Bad的過(guò)表達(dá)，這種過(guò)表達(dá)提示Bad在一定程度上能促進(jìn)CA組織中角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡，抑制CA的過(guò)度增生。
　　2．PCNA在CA組織中的陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組，表明CA組織中存在PCNA的高表達(dá)，這種高表達(dá)提示CA組織中角質(zhì)形成細(xì)胞存在異常的增殖。
　　3．在CA組織中促凋亡蛋白Bad和增殖細(xì)胞核抗原PCNA之間的表達(dá)呈正相關(guān)，提示Bad和PCNA可能共同參與CA的發(fā)生、發(fā)展，也提