尖銳濕疣患者皮損內(nèi)TLR7和T細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義.pdf

1、背景及目的:尖銳濕疣(condyloma acuminata，CA)是人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染導(dǎo)致，主要表現(xiàn)為生殖器-肛門區(qū)域皮膚、粘膜的疣狀增生，亦可出現(xiàn)在口腔、氣道等部位。目前尚缺乏特異性抗HPV感染的藥物或手段，CA易復(fù)發(fā)、易傳染，且具有一定致癌性，嚴(yán)重影響患者身心健康，對控制HPV在人群中的傳播帶來巨大壓力，造成嚴(yán)重的社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。由于CA是病毒感染，在自然病程中，機(jī)體對病毒的清除主要依

2、賴于免疫系統(tǒng)的應(yīng)答反應(yīng)。而研究發(fā)現(xiàn)，CA患者外周血及皮損局部存在T淋巴細(xì)胞亞群異常及細(xì)胞因子失衡，機(jī)體不能產(chǎn)生有效的抗HPV免疫效應(yīng)，導(dǎo)致HPV得以持續(xù)感染，CA即可能反復(fù)發(fā)生。目前研究多認(rèn)為，機(jī)體對HPV感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)主要包括固有免疫及適應(yīng)性T細(xì)胞免疫，尤其依賴于適應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答對HPV感染細(xì)胞的清除。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)是重要的模式識別受體，可激活固有免疫、適應(yīng)性T細(xì)胞免疫。人類目前

3、發(fā)現(xiàn)TLR1-10，TLR7激動劑咪喹莫特治療CA有效提示TLR7在誘導(dǎo)抗HPV免疫反應(yīng)中起到了重要作用。根據(jù)T細(xì)胞功能的不同，可將其分為輔助性T細(xì)胞(helper T lymphocyte，Th)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryT cell，Treg或Tr)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T cell，Tc)等。Tc對感染細(xì)胞具有細(xì)胞毒性殺傷作用，Th則有加強(qiáng)Tc、固有免疫細(xì)胞功能的作用。Treg可以通過抑制Th、Tc以及固

4、有免疫效應(yīng)細(xì)胞活性調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答效應(yīng)，與病毒的持續(xù)感染密切相關(guān)。而叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(forkhead box P3，F(xiàn)oxp3+)的表達(dá)與Treg的分化、功能關(guān)系密切，是其具備抑制功能的特異性標(biāo)志之一。其中Th表型為CD4+，Tc表型為CD8+，Treg表型可為CD4+或CD8+;CD8+Treg數(shù)極少，在CD8+T細(xì)胞中Tc一般占主導(dǎo)地位。目前對CA患者皮損局部TLR7表達(dá)的報道并不一致，其意義也未確定;盡管有關(guān)于CA皮損T淋巴亞

5、群的報道，尚少見關(guān)于CA皮損局部Treg，以及Treg與CD4+T、CD8+T細(xì)胞的比值報道，更鮮見Treg/Th、Tr/Tc的報道。本研究通過觀察CA患者皮損局部TLR7分布、表達(dá)變化，探討其在CA發(fā)病中的作用;觀察Foxp3+ Treg與CD4+T、CD8+T細(xì)胞分布、數(shù)量、比值變化，分析其與CA發(fā)病、轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。研究結(jié)果以期為CA以及其他相關(guān)疾病的預(yù)防、治療提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考，亦為下一步研究積累部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法:選

6、取30例初發(fā)CA患者作為實(shí)驗(yàn)組，記錄其疣體數(shù)量、大小、部位，常規(guī)消毒后于2％利多卡因局部麻醉下切取其疣體組織;選取12例身體健康者切取的包皮內(nèi)板組織作為正常對照組。所有樣本組織均經(jīng)10％中性福爾馬林溶液固定后常規(guī)制成蠟塊，采用免疫組織化學(xué)方法，觀察組織內(nèi)TLR7、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞以及Foxp3+Treg的表達(dá)。數(shù)據(jù)采用SPSS13.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，由于TLR7可表達(dá)于多種細(xì)胞內(nèi)，其表達(dá)情況按染色強(qiáng)度計分，數(shù)據(jù)

7、屬于有序等級資料，采用秩和檢驗(yàn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，用平均秩表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)置為α=0.05（雙側(cè)），即當(dāng)P＜0.05時認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。T細(xì)胞亞群的表達(dá)，其數(shù)據(jù)為計數(shù)數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)CA組與正常健康對照組的免疫狀態(tài)差異采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)置為α=0.05（雙側(cè)），即當(dāng)P＜0.05時認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.CA患者組TLR7平均秩為26.2，正常對照組平均秩為9.75，Z值為-3.9

8、46，CA組較正常對照組表達(dá)顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　2.CA組HE染色真皮層可見中到大量淋巴細(xì)胞浸潤，正常對照真皮較少見淋巴細(xì)胞浸潤;免疫組化染色結(jié)果顯示CA組皮損內(nèi)CD4+T細(xì)胞數(shù)為27.33±3.66，CD8+T細(xì)胞數(shù)為36.48±3.98均較正常對照組的CD4+T細(xì)胞數(shù)14.38±7.07，CD8+T細(xì)胞數(shù)9.78±4.73顯著升高，差異具有顯著性(P＜0.01）;CD4+T/CD8+T淋巴細(xì)胞比值

9、降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.CA組Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)為7.83±0.49明顯高于正常對照組Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)的1.60±0.94，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);CA組Foxp3+Treg/CD4+T比值為0.29±0.04，F(xiàn)oxp3+Treg/CD8+T比值為0.22±0.03分別高于正常對照組Foxp3+Treg/CD4+T比值0.10±0.07，F(xiàn)oxp3+Treg/CD8+T比值0

10、.14±0.09，差異有有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.CA患者皮損局部TLR7表達(dá)較正常對照組顯著增強(qiáng)，主要分布于基底層、棘層角質(zhì)形成細(xì)胞，提示其在抗HPV感染中可能有重要作用。
　　2.CA患者皮損局部CD4+T、CD8+T細(xì)胞，較正常對照組均增多，提示機(jī)體啟動了對HPV感染細(xì)胞的T細(xì)胞免疫反應(yīng);但CD4+T/CD8+T比值降低，提示可能存在某些因素導(dǎo)致CD4+T受到的趨化相對較弱，或CD4+T