姜黃素對黃牛卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量的影響.pdf

1、本研究以黃牛卵母細(xì)胞為研究對象，通過探討姜黃素(Curcumin)對黃牛卵母細(xì)胞體外成熟(Matured in vitro，IVM)及其隨后體外受精胚胎發(fā)育的影響，并結(jié)合卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體合成基因的表達(dá)及線粒體生物活性的變化情況，探究姜黃素對黃牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響及其作用機(jī)制，為進(jìn)一步優(yōu)化黃牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系提供理論依據(jù)。
　　首先，探討了姜黃素對黃牛卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量及卵母細(xì)胞早期胚胎發(fā)育的影響。分別添加不同濃度的姜

2、黃素(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L)到卵母細(xì)胞成熟液中用以培養(yǎng)黃牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)24h。結(jié)果顯示:添加10μmol/L姜黃素處理組的卵母細(xì)胞成熟率顯著高于5μmol/L、15μmol/L處理組和對照組（73.00％±4.07％ vs63.29％±4.76％,65.23％±2.73％，62.04％±2.98％，p＜0.05）。同時對成熟之后的黃牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精的研究發(fā)現(xiàn):成熟液

3、中添加10μmol/L姜黃素與對照組相比能顯著提高黃牛卵母細(xì)胞體外受精后胚胎卵裂率（78.16％±2.19％ vs70.18％±2.95％）及囊胚發(fā)育率(28.19％±2.91％vs21.58％±3.54％，p＜0.05);且對囊胚細(xì)胞數(shù)的檢測發(fā)現(xiàn)，10μmol/L姜黃素處理組囊胚的細(xì)胞數(shù)要顯著高于對照組（110.2±7.48vs103.43±7.04，p＜0.05）。
　　其次，探討了姜黃素提高黃牛卵母細(xì)胞體外成熟率的作用機(jī)制。

4、通過熒光定量PCR對體外成熟培養(yǎng)后黃牛卵母細(xì)胞線粒體轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn):姜黃素各處理組的MⅡ期黃牛卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體生物合成的中樞調(diào)節(jié)因子PGC-1α、及線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)和解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)的mRNA表達(dá)水平與對照組相比均有著顯著地上調(diào)(p＜0.05)。采用Hochest染色法檢測黃牛卵母細(xì)胞質(zhì)內(nèi)TFAM蛋白表達(dá)的分析結(jié)果顯示:10μmol/L姜黃素處理組的MⅡ期黃牛卵母細(xì)胞TFAM蛋白的表達(dá)水平明顯地高于對

5、照組(p＜0.05)。利用線粒體熒光探針對MⅡ期黃牛卵母細(xì)胞進(jìn)行染色觀察發(fā)現(xiàn)，10μmol/L姜黃素處理組和對照組的MⅡ期黃牛卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體在整個卵子胞質(zhì)內(nèi)呈均勻分布，但10μmol/L姜黃素處理組的線粒體相對熒光強(qiáng)度要顯著高于對照組(p＜0.05)。同時對黃牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)ATP的檢測結(jié)果顯示:10μmol/L姜黃素處理組中MⅡ期卵母細(xì)胞內(nèi)的ATP含量略微低于對照組，但差異不顯著(P＞0.05)。線粒體DNA拷貝數(shù)相對

6、表達(dá)量分析發(fā)現(xiàn):10μmol/L姜黃素的處理組卵母細(xì)胞mtDNA拷貝數(shù)顯著高于對照組(p＜0.05)。
　　以上結(jié)果表明:(1)黃牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液中添加適宜濃度（10μmol/L）的姜黃素有利于促進(jìn)黃牛卵母細(xì)胞體外成熟及其隨后胚胎的早期發(fā)育;(2)姜黃素通過促進(jìn)卵母細(xì)胞中線粒體生物合成中樞基因PGC-1α和轉(zhuǎn)錄因子TFAM及解偶聯(lián)蛋白UCP2表達(dá)的上調(diào)，促進(jìn)線粒體生物合成，從而提高內(nèi)源性線粒體含量及活性進(jìn)而提高黃牛卵母細(xì)胞