NSCLC的WZB117耐藥株建立及耐藥機制研究.pdf

1、目的:肺癌的主要特征是肺組織中出現不受控制的細胞生長，可以轉移到附近的組織或擴散到肺以外的區(qū)域。在肺癌治療中抗腫瘤藥物的廣泛使用，使得癌細胞出現對藥物抵抗的能力。個體在對藥物的敏感程度上不同，具有適應性的癌細胞能在藥物治療中存活下來，表現出更強的耐藥性。一些抗腫瘤藥物的原理是通過結合特殊蛋白或分子來抑制癌癥細胞發(fā)展，最后使其自行衰亡。抗腫瘤藥物的特定靶點只特異性結合一種癌細胞的特定蛋白或者分子，所以藥物只能抑制癌細胞的一條通路。在耐藥性

2、沒產生之前，癌細胞的某一通路持續(xù)受到抑制，患者的病情得以控制。這是很多癌癥患者在未出現耐藥性的時候服用單靶點治療藥物，治療效果非常顯著的主要原因。在某一通路受到抑制的同時，癌細胞選擇其他通路促進自身的生長。最終，抗腫瘤藥物將徹底失去治療效果，藥物難以抑制癌細胞的發(fā)展，產生了耐藥性。
　　WZB117是葡萄糖轉運蛋白1的抑制劑，一種新型的抗腫瘤藥物。已有研究表明，WZB117對肺癌和乳腺癌有治療效果。WZB117可以減少細胞運輸葡萄

3、糖，從而降低癌細胞中葡萄糖轉運蛋白1、細胞內ATP以及糖酵解酶水平，導致癌細胞周期阻滯、衰老和壞死。
　　本研究目的明確，在人非小細胞肺癌中成功構建WZB117耐藥株，并以此為基礎探究耐藥機制。
　　方法:1.經過預實驗和誘導耐藥成功構建人非小細胞肺癌WZB117耐藥株(H1299/WZB117)。2.顯微鏡下觀察H1299和H1299/WZB117的細胞形態(tài)。3.進行平板克隆和CCK8實驗檢測WZB117對H1299和H1

4、299/WZB117增殖和生存能力的影響。4.利用劃痕實驗檢測WZB117對H1299和H1299/WZB117遷移能力的變化。5.通過流式細胞術細胞凋亡實驗檢測WZB117對H1299和H1299/WZB117凋亡的影響。6.提取H1299和H1299/WZB117的RNA進行RNA-Seq測序，對測序結果進行GO分析。7.根據GO分析結果，提出耐藥機制的假設，設計引物通過PCR驗證。
　　結果:1.成功構建H1299/WZB1

5、17。2.顯微鏡下觀察，與H1299相比H1299/WZB117細胞形態(tài)發(fā)生變化，異型性增加，觸角伸出，細胞更加狹長。3.WZB117明顯抑制H1299的克隆形成能力和細胞活力，對H1299/WZB117的抑制作用較小。4.WZB117明顯抑制H1299的遷移，對H1299/WZB117的抑制作用較小。5.WZB117誘導H1299發(fā)生細胞凋亡，對H1299/WZB117的誘導作用較小。6.H1299/WZB117對WZB117抵抗可能

6、基因的剪接、上調和下降有關。H1299/WZB117的耐藥發(fā)生可能與NUMA1的長短剪接本含量變化有關。H1299/WZB117中NUMA1發(fā)生了剪接本含量的變化，SCD和FAM198B含量上升，ID3和ICAM1含量減少。
　　結論:本研究成功構建了H1299/WZB117，細胞表型實驗證明WZB117可以明顯抑制H1299的增殖、遷移和誘導凋亡，并且對H1299/WZB117的效果并不顯著。同時對耐藥機制進行了初步探討，為解決