多肽藥物匯利心康對(duì)大鼠慢性心衰的影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是多種原因引起心肌結(jié)構(gòu)和功能改變所導(dǎo)致的一種以心室泵血功能障礙為特征的復(fù)雜臨床綜合征，是多種心血管疾病的終末階段。防止心衰的發(fā)生發(fā)展、降低病死率已成為心血管疾病防治的重大關(guān)鍵問題。
　　 近年來，人們對(duì)慢性心衰的病理生理過程研究的逐步深入，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)從液體潴留、泵功能障礙、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的過度激活，逐漸發(fā)展到心肌重構(gòu)。
　　 心肌重構(gòu)是心衰

2、發(fā)生、發(fā)展的重要分子細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，因而針對(duì)心力衰竭的治療已由傳統(tǒng)的“強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管”逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槟孓D(zhuǎn)心室重構(gòu)的治療。在慢性心衰的發(fā)生過程中，代償性心肌肥大有助于增加心肌收縮力和提高心輸出量，而失代償性肥大則引起心肌耗氧量增加和心衰惡化。抗心肌重構(gòu)治療勢(shì)必影響心功能。
　　 匯利心康(huilixinkang，HLXK)是我室針對(duì)Gq蛋白α亞單位克隆制備出的一種G蛋白抑制性多肽藥物，既往研究證實(shí)，HLXK能有效抑制血管緊張素(an

3、giotensin，Ang)II、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)誘導(dǎo)的離體心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)，防治多種不同動(dòng)物模型的左心室重構(gòu)，抑制野百合堿誘導(dǎo)的右心室重構(gòu)。鑒于心肌重構(gòu)在慢性心衰發(fā)病過程以及預(yù)后中的重要作用，研究HLXK對(duì)CHF的影響十分必要。
　　 方法：
　　 1．動(dòng)物分組與模型建立：健康清潔級(jí)SD 雄性大鼠48只，體重200～220g，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、氯沙坦組(6mg/kg，ig，qd)

4、、HLXK(10、30、90μg/kg，ip，bid)組(n=8)。采用阿霉素15天內(nèi)8次遞增劑量腹腔注射方法制備大鼠慢性心衰模型，按分組分別給藥，連續(xù)10w；
　　 2．實(shí)驗(yàn)過程中，密切觀察大鼠的一般狀況及死亡情況。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每隔四天稱量體重一次，并以此為依據(jù)調(diào)整給藥劑量；
　　 3．末次給藥后，應(yīng)用高頻彩色超聲診斷儀，測(cè)量大鼠左心室舒張末期內(nèi)徑(LVDD)、收縮末期內(nèi)徑(LVSD)，左心室舒張末期后壁厚度(LVPW

5、D)、收縮末期后壁厚度(LVPWS)，左房?jī)?nèi)徑(LA)；并計(jì)算左室舒張末期容積(LVEDV)、收縮末期容積(LVESV)、每博量(SV)、射血分?jǐn)?shù)(EF)和短軸縮短率(FS)；
　　 4．稱重法測(cè)定HW、LVW；HE 染色、光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)改變；Real-time PCR檢測(cè)心肌組織中α-MHC mRNA、β-MHC mRNA及Brg1mRNA的表達(dá)水平；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)左心室α-MHC、β-MHC、Bcl-2和Bax蛋白

6、的表達(dá)；Western blot 檢測(cè)Brg1、p-ERK1/2、PKCε及PKCβⅡ蛋白的表達(dá)；
　　 5．分別采用定磷法和化學(xué)發(fā)光法測(cè)定心肌肌漿網(wǎng)SERCA2a的活性、血漿肌鈣蛋白I 含量。
　　 結(jié)果：
　　 1．對(duì)照組大鼠皮毛順滑有光澤，精神佳，進(jìn)食活動(dòng)自如；心衰模型組大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡、脫毛、活動(dòng)較少，體重增加緩慢；而各給藥處理組大鼠活動(dòng)基本自如，精神可，體重增長(zhǎng)接近對(duì)照組；
　　 2．阿霉素

7、可明顯誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)慢性心衰。HLXK(30、90μg/kg)能明顯改善心衰大鼠心肌組織損傷，降低的心臟指數(shù)和左心室指數(shù)，提高心臟的射血分?jǐn)?shù)和短軸縮短率；
　　 3．HLXK(30、90μg/kg)能明顯增加慢性心衰大鼠α-MHC表達(dá)，降低β-MHC和Brg1的表達(dá)；
　　 4．HLXK(30、90μg/kg)處理能明顯增強(qiáng)慢性心衰大鼠心肌肌漿網(wǎng)SERCA2a的活性，降低血漿中肌鈣蛋白I 含量；
　　 5．HLXK

8、(30、90μg/kg)能明顯提高慢性心衰大鼠PKCε、p-ERK1/2和Bcl-2蛋白的表達(dá)，降低PKCβⅡ、Bax表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1．Gq蛋白α亞單位羧基端模擬肽匯利心康能有效改善慢性心衰大鼠心臟功能，減輕心肌組織損傷，抑制左心室重構(gòu)；
　　 2．匯利心康能通過上調(diào)心肌細(xì)胞Bc1-2、下調(diào)Bax表達(dá)，保護(hù)心肌細(xì)胞的線粒體而抑制左心室心肌細(xì)胞凋亡；
　　 3．匯利心康的抗心衰作用與下調(diào)Brg