天然產(chǎn)物薊黃素對心衰大鼠心肌重塑的影響及其分子機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　薊黃素(Cirsimaritin)是一種天然來源的黃酮類化合物，這種小分子物質(zhì)具有抗菌、抑制炎癥、抑制腫瘤、抗氧化以及保護(hù)腎功能等方面的作用。然而，薊黃素是否具有心臟保護(hù)作用仍不清楚。我們通過制作異丙腎上腺素誘導(dǎo)的充血性心力衰竭大鼠模型對薊黃素的療效和作用機(jī)理進(jìn)行研究。
　　方法：
　　以皮下注射異丙腎上腺素（ISO）的方法獲取心衰大鼠模型。按體重大小將SD大鼠編號并隨機(jī)分為兩組：正常(NS)組（n=10）

2、，模型(ISO)組（n=80）。模型組大鼠于頭皮處間隔24h共兩次皮下注射異丙腎上腺素（170mg/kg）。ISO組中左室射血分?jǐn)?shù)小于45％的大鼠作為合格心衰模型，將其隨機(jī)分為5組：模型對照組（control group，n=15），依那普利組（enalapril1 mg/kg/day group，n=12），薊黃素小劑量組（cirsimaritin25 mg/kg/day group，n=11），薊黃素中等劑量組（cirsimarit

3、in50 mg/kg/day group，n=10），薊黃素大劑量組（cirsimaritin100 mg/kg/day group，n=12）。按設(shè)定好的用藥劑量給各組大鼠灌胃給藥8周。對各組大鼠的左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率和最大下降速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)等指標(biāo)用生物機(jī)能檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測，并用軟件分析各組信息。將實(shí)驗(yàn)大鼠采用頸動(dòng)脈放血的方法處死，取血液冷凍留存用于檢

4、測神經(jīng)內(nèi)分泌方面的指標(biāo)。取出大鼠心臟沖洗干凈用濾紙吸干，稱重后去掉右室游離壁部分，余左室及室間隔部分稱重，得到左心室重量(LVM)、左心室重量指數(shù)(LVMI)。剪取左室部分組織液氮保存留待檢測其它指標(biāo)。大鼠心臟標(biāo)本制作病理切片，作HE和Masson染色。應(yīng)用光學(xué)顯微鏡觀察心臟病理切片的下列病變并攝片：各層心內(nèi)膜和心外膜有無充血水腫、炎性細(xì)胞浸潤；心肌間質(zhì)有無充血水腫、炎癥細(xì)胞浸潤和結(jié)締組織增生；心肌細(xì)胞有無肥大、變性及壞死。根據(jù)各種病變

5、嚴(yán)重程度的差異，0分認(rèn)為是無病變者，有病變者由輕至重依次評分為1-5分。把各組里的每只大鼠得到的所有分?jǐn)?shù)相加取平均值。用樣本堿水解法測定心室肌羥脯氨酸含量，ELISA試劑盒測定各細(xì)胞因子濃度。采用實(shí)時(shí)定量PCR以及明膠酶譜法檢測MMP-2與MMP-9的表達(dá)水平及酶活。大鼠左室心肌組織取樣，以及體外制備乳鼠心肌細(xì)胞，與薊黃素體外培養(yǎng)。采用免疫印跡法測定薊黃素在蛋白水平對大鼠心肌LC3 II/LC3 I的比值等的影響。利用MDC染色和電鏡技

6、術(shù)檢測自噬體的形成，采用免疫印跡的手段考察薊黃素對相關(guān)自噬通路的影響。
　　結(jié)果：
　　皮下注射異丙腎上腺素可導(dǎo)致嚴(yán)重的心力衰竭，具體表現(xiàn)為左室質(zhì)量指數(shù)、心率、左室舒張末壓增加，而左室收縮壓及室內(nèi)最大上升速率以及最大下降速率下降。心臟彩超結(jié)果亦顯示模型大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)明顯下降。與之相對應(yīng)，薊黃素可呈劑量依賴性逆轉(zhuǎn)心臟形態(tài)學(xué)和血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)，能顯著降低心衰大鼠血清Ang II，TNF-α，NE以及BNP等細(xì)胞因子的水平，改善

7、心肌組織學(xué)方面的變化，包括心肌細(xì)胞肥厚、變性、炎癥細(xì)胞浸潤以及結(jié)締組織增生等。并且，薊黃素可下調(diào)與調(diào)控膠原產(chǎn)生有關(guān)的MMP-2與MMP-9的表達(dá)和活性。也發(fā)現(xiàn)薊黃素在體內(nèi)體外均可促進(jìn)心肌細(xì)胞自噬的水平，并且該作用與顯著抑制AKT1-RPS6KB1信號通路有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　薊黃素一方面通過促進(jìn)心肌細(xì)胞自噬，另一方面通過抑制MMP-2及MMP-9的表達(dá)水平與活性，調(diào)控膠原產(chǎn)生，從而達(dá)到改善心衰模型大鼠左心功能，減輕心肌重塑