VEGF及其DNA甲基化在低氧預(yù)適應(yīng)小鼠神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)建立小鼠低氧預(yù)適應(yīng)模型，觀(guān)察小鼠海馬中VEGF的表達(dá)，從而了解VEGF和它的DNA甲基化是否參與低氧預(yù)適應(yīng)小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：
　　1側(cè)腦室注射.選擇6—8周齡，體重18—22g KM雄性小鼠隨機(jī)分為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-cdR處理組和對(duì)照組；2復(fù)制動(dòng)物模型：每組又分為非低氧暴露（H0)、1次低氧暴露（H1)和重復(fù)低氧4次暴露（H4)三個(gè)處理組，每組8只，于低氧暴露后0，1，2，

2、3和4d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；3低氧實(shí)驗(yàn)：將小鼠置于含有新鮮空氣、標(biāo)定為125ml廣口瓶?jī)?nèi)，用橡皮塞密閉，開(kāi)始記時(shí)。當(dāng)小鼠出現(xiàn)喘式呼吸，立即取出放入到另一廣口瓶?jī)?nèi)，密閉，記時(shí)，以此類(lèi)推4次。各組小鼠低氧完成后隨即斷頭，取出海馬并置于-80℃低溫冰箱中保存；4 Real-timePCR法檢測(cè)各組海馬VEGF的mRNA水平的表達(dá)；5 Western blot分析法檢測(cè)各組海馬VEGF蛋白水平的表達(dá)；6 luciferase實(shí)驗(yàn):克隆 VEGF prom

3、oter區(qū)并亞克隆入 pGL3-basic，檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄活性結(jié)果Real-time PCR和Western blot結(jié)果以β-actin為內(nèi)參得到各組相對(duì)值，經(jīng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較得出:（1）與未予低氧的對(duì)照組H0-0組相比，低氧零天一次H0-1組中VEGFmRNA表達(dá)明顯增加，低氧零天四次H0-4組VEGFmRNA與H0組相近，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05，H0-0組與H0-1組差異顯著（P<0.05）；(2)5-Aza-cdR處理H0-

4、1組和 H0-4組 VEGFmRNA表達(dá)比 H0-0組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（3) Western blot結(jié)果,Control組和實(shí)驗(yàn)組，隨著低氧后時(shí)間的增加， VEGF蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)先增加后降低，再增加后又降低的趨勢(shì)，但無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)差異。
　　結(jié)論：
　　低氧和低氧預(yù)適應(yīng)在小鼠大腦海馬組織中VEGF mRNA表達(dá)有明顯變化；VEGF mRNA在低氧后表達(dá)明顯增加，而低氧預(yù)適應(yīng)后無(wú)明顯變化，表明低氧預(yù)適