CTR1核心巖藻糖基化修飾在卵巢癌細胞順鉑吸收過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用.pdf

1、上皮性卵巢癌是目前為止全世界最致命的婦科惡性腫瘤。對于患者來說，卵巢癌的常規(guī)治療是腫瘤細胞減滅術，術后聯(lián)合鉑類與紫杉醇的一線化療方案。卵巢癌患者對于鉑和紫杉醇一線化療的臨床反應率大約有80％。雖然具有高的響應率，但是上皮性卵巢癌的耐藥性較高，預后性差，晚期卵巢癌患者5年的生存率小于30％。
　　耐藥性的產(chǎn)生與細胞內(nèi)鉑類藥物攝入的減少、解毒的能力增強、凋亡途徑異常以及DNA損傷后DNA修復能力的增強等相關。其中，順鉑攝取的抑制被認為

2、是卵巢癌順鉑耐藥的主要原因，它通常發(fā)生在卵巢惡性腫瘤的惡性轉化過程中。細胞膜上的銅轉運體1(CTR1)是一種銅離子的轉運體，在調(diào)節(jié)銅的穩(wěn)態(tài)過程中起著關鍵作用，同時也是酵母和哺乳動物中攝取順鉑的關鍵分子。
　　核心巖藻糖基化是由核心巖藻糖基轉移酶(Fut8)催化下進行的。核心巖藻糖基化通過改變糖蛋白的構象、定位及表達，在細胞內(nèi)發(fā)揮重要生理作用。核心巖藻糖基化可以調(diào)節(jié)細胞表面蛋白CTR1與鉑類之間的相互作用，進而影響癌細胞的鉑類藥物攝

3、取及耐藥性的獲得。CTR1介導的順鉑攝取依賴于其金屬結合外顯子結構域，由于該結構域具有N-糖基化位點，推測N-糖基化與順鉑攝入密切相關，而CTR1核心巖藻糖基化在卵巢癌中的順鉑攝取和鉑的耐藥作用機理尚未闡明。
　　目的:闡明CTR1核心巖藻糖基化與卵巢癌順鉑耐藥機制的相關性。
　　方法:通過凝集素印記方法檢測卵巢癌患者和正常人血清之間核心巖藻糖基化水平差異。通過凝集素印記、qPCR、MTT、細胞周期以及細胞凋亡等實驗方法檢測

4、順鉑敏感型細胞與順鉑耐藥性細胞對順鉑的敏感性。在卵巢癌患者的病理切片中，通過免疫組化的方法檢測癌組織與癌旁組織的CTR1的表達的差異，同時，用流式細胞術、免疫沉淀、電感耦合等離子體質(zhì)譜以及檢測CTR1與順鉑之間的相互作用。然后，通過構建核心巖藻糖敲除的特定細胞系以及恢復模型，進一步的驗證核心巖藻糖基修飾與順鉑耐藥性之間的關系。最后，利用磷酸化的實驗，研究卵巢癌細胞以及小鼠的卵巢上皮細胞的信號轉導通路。
　　結果:在血清的檢測中，與

5、正常人相比，卵巢癌患者的血清中核心巖藻糖基化水平明顯增多。順鉑化療的患者血清中核心巖藻糖基化水平明顯高于正常人和未經(jīng)過化療的患者的血清。在卵巢癌的細胞系中，順鉑耐藥型細胞的核心巖藻糖基化水平明顯高于順鉑敏感型細胞，并且，經(jīng)過順鉑處理之后，與敏感性細胞相比，耐藥型細胞的存活率高、細胞凋亡率低。雖然CTR1在細胞膜上的表達在兩種細胞中無明顯的差異，但順鉑耐藥型細胞的核心巖藻糖基化水平要明顯的高于順鉑敏感型細胞。與順鉑敏感型細胞相比，順鉑耐藥

6、型細胞膜表面CTR1與順鉑之間的相互作用明顯減弱。還有，在順鉑耐藥型細胞中，鉑的吸收量明顯低于順鉑敏感型細胞。在小鼠卵巢上皮細胞中，核心巖藻糖基化修飾的缺失促進細胞對順鉑的攝取。
　　結論:順鉑耐藥型細胞中CTR1的核心巖藻糖基化水平顯著高于順鉑敏感型細胞。高核巖藻糖基化抑制了CTR1與順鉑的相互作用及順鉑攝取。Fut8+/+卵巢上皮細胞相比，在Fut8-/-小鼠卵巢上皮細胞中順鉑的攝取量明顯增多，而在Fut8基因恢復細胞模型中順