群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控蛋白R(shí)saL的結(jié)構(gòu)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是一種普遍存在的革蘭氏陰性桿菌。它對(duì)許多抗生素具有很高的內(nèi)在抗藥性，是病人在醫(yī)院期間發(fā)生感染的第三大致病菌，且很難治愈。因此，尋找新的藥物作用靶點(diǎn)開發(fā)新型抗致病力藥物是目前研究的主要內(nèi)容。群體感應(yīng)（Quorum Sensing,QS）是細(xì)菌之間交流的一種方式，銅綠假單胞菌中的群體感應(yīng)系統(tǒng)主要由Las，Rhl和PQS三個(gè)系統(tǒng)組成，它們控制著細(xì)菌中許多重要的功能。RsaL作為

2、QS的抑制子，與LasR共同調(diào)控著QS中信號(hào)分子的內(nèi)態(tài)平衡，同時(shí)通過調(diào)節(jié)多種基因的轉(zhuǎn)錄水平，影響著毒力、生物被膜(biofilm)等許多重要的表型。然而，其具體的功能及其調(diào)節(jié)途徑并沒有被完全闡述。本實(shí)驗(yàn)利用ChIP-seq在PAO1全基因組中找到了RsaL直接結(jié)合的兩個(gè)位點(diǎn)，它們分別位于PA2228/PA2229和pqsH/cdpR的基因間隔區(qū)。以前的研究表明，PqsH和CdpR都與PQS信號(hào)分子的合成有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在rsaL基因

3、的敲除突變體(△rsaL)中pqsH和cdpR基因的表達(dá)水平較野生型菌株P(guān)AO1下降了很多，從而也降低了PQS信號(hào)分子的產(chǎn)量。rsaL基因的突變導(dǎo)致了PAO1菌體中生物被膜的降低和綠膿菌素的升高，這些表型主要是由于pqsH或cdpR轉(zhuǎn)錄水平的變化引起的。此外，解析了RsaL-DNA復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)RsaL的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域類似于HTH結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)在許多轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子中都是十分保守的。通過定點(diǎn)突變和回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，我們確定了RsaL與DNA