梨火疫病菌群體感應系統的初步研究.pdf

1、由Erwinia amylovora引起的火疫病是一類毀滅性的細菌病害，常造成嚴重的經濟危害。為了有效防治病害的發(fā)生及危害，人們對其致病因子的分子機理作了大量的研究。而許多植物病原細菌毒性因子的產生都依賴于群體感應(quorum sensing，QS)調節(jié)系統的調節(jié)。 LuxS蛋白參與細菌群體感應(QS)信號分子autoinducer-2(AI-2)合成的最后一步。本研究首次鑒定了Er.amylovora中的luxS同源

2、基因。通過Vibrio harveyi發(fā)光檢測系統檢測到Er.amylovora菌株0056能夠合成AI-2，AI-2的最大功能活性出現在對數生長后期。0056分別用AB、LB和NB培養(yǎng)液培養(yǎng)，結果顯示在NB中產生AI-2的量最大。Er.amylovora的luxS同源基因在luxS缺陷的菌株Escherichia coli DH5a中表達，發(fā)現DH5a可恢復產生AI-2的能力；并通過構建Er.amylovora的luxS突變體進一步證

3、明Er.amylovora中的luxS同源基因在合成AI-2分子中起決定性作用，但其突變體對梨幼果的致病能力并未降低，然而其生長能力與野生菌株相比有所下降，突變體與野生菌株共培養(yǎng)發(fā)現突變體幾乎不能夠生長。我們初步推斷AI-2分子可能影響到Er.amylovora對環(huán)境的適合度。 SdiA屬于與群體效應相關的luxR家族基因，目前已證實存在于Es.coli和Salmonella typhimurium基因組中。本研究從梨火

4、疫病菌中克隆到了一個sdiA的同源基因，該基因與Es.coli和S.typhimurium的sdiA基因在氨基酸水平上分別有45.42％和43.33％6＃同源性，69.58％和67.08％的相似性。Southern雜交顯示其基因在梨火疫基因組中有兩個拷貝。此外，本研究根據梨火疫病菌和其它細菌的luxR同源基因序列比對結果設計了一對特異引物F-EA和R-EA，該引物能夠特異地區(qū)分梨火疫和其它細菌，并能夠成功地檢測到10cfu的菌體，在含有